詳細介紹
小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2DAP培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2DAP培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 這株細胞生成一種可以感染小鼠細胞的載體。 Psi2 DAP細胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 這株細胞通過Psi2細胞插入一個重組的逆轉錄病毒(DAP)基因組衍生而來。 被這種Psi2 DAP產(chǎn)生的載體感染的細胞表達的磷酸酯酶可用組織化學方法檢測,可以用作體內(nèi)追蹤他們命運的標記。 這些細胞也可能產(chǎn)生輔助病毒。 檢測輔助病毒的方法或其他逆轉錄病毒技術,請參考Cepko, C.L. Lineage analysis and immor
小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2DAP培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2DAP培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 熒光素標記核轉錄因子NF-κB受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
嗜鉻粒素A抗體 Anti-CGA 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗馬IgM 0.1ml
Fibulin 1 英文名稱: “衰老關鍵蛋白”抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKC beta 1/2 蛋白激酶C beta 1/2抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
PR(Progestogerone receptor)Human 人孕激素受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NOC3L/FAD24 脂肪細胞分化因子24 規(guī)格 0.2ml
Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit 人β乳球蛋白 96T
TUBA1C 英文名稱: 微管相關蛋白α6抗體 0.1ml
C1orf112 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框112抗體 0.2ml
Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Syntenin 2 英文名稱: 多配體聚糖結合蛋白2抗體 0.2ml
PHC1 英文名稱: 早期發(fā)育調控蛋白1抗體 0.2ml
增殖細胞核抗原抗體 Anti-PCNA 0.1ml
Anti-SRG5/SPATA12/FITC 熒光素標記發(fā)生相關基因5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NF1(Ser2515) 磷酸化1型神經(jīng)纖維瘤抗體 規(guī)格 0.1ml
fgL2 (Fibrinogen-like 2) 凝血酶原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠胚胎成纖維細胞;Psi2DAP培養(yǎng)BetaGAL(Human Alpha-galactosidase) ELISA Kit 人β半乳糖苷酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NKA 神經(jīng)激肽A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-13Ra1 白細胞介素-13受體a1抗體 規(guī)格 0.1ml
BGP/Gehrelin(Mouse brain-gut peptides) ELISA Kit 小鼠腦腸肽 96T
phospho-PARK2(Ser101) 英文名稱: 磷酸化帕金蛋白抗體 0.1ml
Complement C3 英文名稱: 補體C3a過敏毒素抗體 0.1ml
Anti-NKA 神經(jīng)激肽A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml