動物受到病毒感染后，體內產生特異性中和抗體，并與相應的病毒粒子呈現(xiàn)特異性結合，因而阻止病毒對敏感細胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和試驗 (Neutralization Test)是以測定病毒的感染力為基礎，以比較病毒受免疫血清中和后的殘存感染力為依據，來判定免疫血清中和病毒的能力。

交叉保護中和步驟

1、將待檢血清用牛血清Hanks 氏液稀釋成1：10，56℃滅活30分鐘；

2、進一步2倍稀釋血清成1：20、1：40、1：80……，對照血清1：10稀釋；

3、稀釋兩種病毒（在冰浴中進行）至含200pfu/ml；

4、各連續(xù)稀釋度血清分別與200pfu/ml的兩種病毒液等量混合（各0.3ml），置37℃中作用1小時（每15分鐘振蕩一次）；

5、吸出各細胞培養(yǎng)孔中維持液；

6、接種長滿單層的Vero-E6細胞（24孔板），每孔接種血清病毒混合液、標準血清對照及兩種病毒對照 ，每稀釋度兩孔，100ul/孔。37℃吸附1小時，每隔15分鐘搖動一次；

7、加第yi層瓊脂糖覆蓋液（需冷置42℃左右），每孔1ml，室溫下待凝固，細胞面朝上，置37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)7-9天；

8、加第二層含中性紅瓊脂糖覆蓋液，1ml/孔，室溫下待凝固，細胞面朝上，置37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)2-5天，從第二天開始觀察空斑數(shù)；

9、抗體滴度的判定，以比病毒對照的空斑數(shù)中和或減少50%的血清zui高稀釋度倒數(shù)判為待檢血清中和抗體滴度；

10、交叉保護中和型別判定：根據同一份血清與兩種病毒的反應滴度不同來區(qū)分，如果一份血清與漢灘病毒 （或漢城病毒）反應的抗體滴度高于與漢城病毒（漢灘病毒）的抗體滴度4倍或以上，即判為漢灘病毒型，反之則為漢城病毒型。兩者滴度相差無幾時，則不好分型。不足4倍時亦不能定型。