“ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素影響”

Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景，小編來帶你看看：

Elisa試劑盒洗滌很重要

洗滌很重要，洗滌步驟看似很無聊，其實(shí)很重要，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

Elisa試劑盒封閉更關(guān)鍵

封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時(shí)間。

如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

Elisa試劑盒檢測試劑要適量

另一點(diǎn)也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。

如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔(dān)心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化，相信很快就會有漂亮的結(jié)果。