ELISA試劑盒試驗原理：

ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知TFR/CD71濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將TFR/CD71和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TFR/CD71的活性濃度呈比例關系。

ELISA試劑盒注意事項：

1．ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值

大于標準品孔孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

ELISA試劑盒操作流程：

1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。

3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。

4. ELISA試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。

5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。

6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。