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大鼠ELISA試劑盒的處理方式
閱讀:119 發(fā)布時(shí)間:2021-4-2大鼠ELISA試劑盒處理方式:
1、胃液、唾液、尿液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,胃液、唾液佳的采集時(shí)間是空腹采集,一般隔夜尿不采集;
2、采集血清時(shí),一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時(shí)后,800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
3、組織提取液、肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmpx5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
4、采集血漿時(shí)一般不加抗凝劑,采集后立即離心800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
5、不貼壁細(xì)胞(分泌性蛋白),將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmpx10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmpx10min,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理。
檢測試劑盒基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。
大鼠ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.保用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
2.按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
3.加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
4.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
5.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
6.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
7.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
8.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
9.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。