細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)常用步驟:

 

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

 

① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。

 

② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。

 

2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體 體積:DNA質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

 

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

 

4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基清洗一次。

 

5. 加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)。

 

6. 到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)。