中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理，當(dāng)樣本中存在中和抗體時(shí)與刺突RBD蛋白結(jié)合，從而阻止了RBD與預(yù)包被板底的ACE2蛋白的結(jié)合，用于病毒中和抗體的定量檢測。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.將100ul2 ug/ml ACE2加入至每孔，4℃孵育過夜；

2.第二天，50 ul稀釋好的樣本+50ul 刺突RBD蛋白混合后，室溫孵育2h；

3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h；

4.移除孔中的封閉液，用200ul wash buffer洗滌一次；

5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液100ul加入孔中，37℃孵育2h；

6.移除孔中的樣本-刺突RBD蛋白混合液，用200ul wash buffer洗滌，洗4次；

7.每孔中加入100ul稀釋好的HRP標(biāo)記的抗兔Fc標(biāo)簽二抗，37℃孵育1h（由于刺突RBD蛋白是帶有兔Fc標(biāo)簽的，所以可以備該二抗特異性識(shí)別并結(jié)合）；

8.移除孔中的二抗，用200ul wash buffer洗滌，洗4次；

9.向每孔加入100ul TMB顯色液，輕輕混合，室溫孵育5min，每孔加入100ul終止液，輕輕混合，在450 nm波長下檢測吸光度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說明目的，不應(yīng)用于計(jì)算未知數(shù)。每次檢測時(shí)均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（競爭法ELISA，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負(fù)相關(guān)）