小鼠ELISA試劑盒分析免疫組化常見(jiàn)問(wèn)題的處理
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時(shí)間。
③ 對(duì)照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測(cè)系統(tǒng)是否和一抗匹配，這一點(diǎn)是非常重要的。比如，如果一抗是兔來(lái)源的抗體，二抗一定要用抗兔的二抗來(lái)匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件，尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體，現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融，試劑保存時(shí)一定要避免與揮發(fā)性有機(jī)溶劑同放一室，以免降低抗體的效價(jià)。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲(chǔ)存條件，用已知陽(yáng)性的標(biāo)本來(lái)同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照。
⑦ 檢查色原/底物溶液，zui簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中，如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化，則可排除底物的因素。需要注意的是，有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)用完，否則會(huì)失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配，溶液的pH值很重要，與過(guò)氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
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