購買細胞處理方法和注意事項

*客戶收到細胞后請務必仔細閱讀細胞注意事項及細胞使用說明書，確保細胞的培養(yǎng)條件一致及售后服務判定標準。

我們公司貼壁細胞的常規(guī)運輸方式是將細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的*培養(yǎng)液并封好瓶口進行運輸。冬季溫度比較低的情況下，我們會根據(jù)收貨人所在省份的平均溫度高低和距離采取對細胞不同狀態(tài)下發(fā)貨，包括活細胞瓶裝發(fā)貨、活細胞胰酶消化離心后血清發(fā)貨、凍存管發(fā)貨?？蛻羰盏郊毎笳垏栏癜凑找韵乱筮M行操作。

1.客戶在收到瓶裝細胞后，先觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，培養(yǎng)液是否混濁，若出現(xiàn)破裂、滲液、培養(yǎng)液混濁等問題，請在收到細胞后的當天與我們的銷售或技術支持聯(lián)xi，我們會及時處理

2.細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的*培養(yǎng)液(內(nèi)含細胞培養(yǎng)的血清含量和雙抗)，封好瓶口是我們正常運輸細胞的方法。細胞出庫前都是處于無菌狀態(tài)，并且生長良好，我們也會對出庫細胞進行拍照留檔。（建議客戶在收到我們的細胞時將培養(yǎng)液拍張照片，觀察培養(yǎng)液的顏色以及是否漏液，觀察細胞時請拍100X、200X 各2-3 張照片進行留存，方便后期細胞狀態(tài)的對比，拍攝的照片應當清晰。）

3.客戶在收到貼壁瓶裝細胞后不開封，先將培養(yǎng)瓶外表面用75%酒精擦拭干凈， 鏡檢細胞貼壁情況。若貼壁良好，請將細胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火，再將多余培養(yǎng)液抽出進行繼續(xù)培養(yǎng)，或直接進行

細胞傳代(消化、傳代步驟詳見細胞使用說明書)；若貼壁細胞有部分細胞懸浮，請先將細胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火，將培養(yǎng)液抽出，依次離心(1000rmp 5min)將懸浮細胞收集后放回原瓶進行過夜培養(yǎng)，并次日觀察貼壁情況。如細胞仍不能貼壁， 請用臺盼藍染色鑒定細胞活力，證實細胞無活力，請將細胞拍照(多倍數(shù)多視野) 及染色照片發(fā)送至技術支持的you箱，我們會盡快處理。(以上僅為貼壁細胞處理方法)。

4.客戶在收到懸浮瓶裝細胞后不開封，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，請將細胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火，將整瓶細胞懸液分別離心(1000rmp 5min)后收集于離心管中，視其離心后的細胞量進行放回培養(yǎng)或分瓶培養(yǎng)。(以上僅為懸浮細胞處理方法)。

5.客戶在收到半懸浮瓶裝細胞后不開封，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，請將細胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火， 將整瓶細胞懸液中的上層懸浮細胞離心(1000rmp 5min)

后收集于離心管中，重懸細胞后放回原瓶與貼壁細胞共同培養(yǎng)至傳代。重懸上層懸浮細胞時必須保持下層貼壁細胞的營養(yǎng)條件，防止貼壁細胞缺乏營養(yǎng)。(以上僅為半懸浮細胞處理方法)。

6.若客戶收到1.8ml 離心管常溫細胞，收到細胞后觀察是否管裂、漏液、污染， 若有以上任何一種現(xiàn)象，請立即拍照后聯(lián)xi我們。若無以上現(xiàn)象，請用75% 酒精對離心管進行消毒后放到操作臺內(nèi)，嚴格無菌操作，過火打開管蓋，將管中的血清細胞輕輕吹

打幾下， 取出后放入15ml 離心管中， 加入雙倍或3 倍的*培養(yǎng)液1000rmp/5min離心，棄上清重懸后與對應的*培養(yǎng)液混勻，加入到培養(yǎng)瓶中過夜培養(yǎng)，第二天觀察細胞狀態(tài)和密度。若密度未達85%則繼續(xù)培養(yǎng)， 若達85%以上則可直接進行傳代。

收到細胞過夜培養(yǎng)24h 后發(fā)現(xiàn)細胞污染或者狀態(tài)不佳，必須在發(fā)現(xiàn)問題的當天即刻向我們銷售人員反饋。(以上僅為血清運輸細胞處理方法)。

7.若客戶收到凍存管細胞，請盡快復蘇。復蘇方法：1、37°水浴晃動直至融化（不要超過一分鐘），移至15ml 離心管，另加入3-5 倍*培養(yǎng)液，1000rmp

5min，棄上清，放入25cm2 瓶中培養(yǎng)，第二天拍照留存有效信息。2、37°水浴晃動直至融化（不要超過一分鐘），直接放進加有6-8ml 培養(yǎng)基的25cm2 瓶中培養(yǎng)，16 小時之后必須換液并拍照留存有效信息。

8.傳代注意事項
胰酶消化的過程至關重要。消化過度細胞會粘連拉絲，嚴重影響細胞活性和后期狀態(tài)；消化不*則細胞難以從瓶壁自行脫落，反復對細胞表面進行吹打會損傷細胞活性，導致細胞后期狀態(tài)差、增值能力低下以及細胞形態(tài)發(fā)生改變。影響消化的因素有很多，主

要包括胰酶溶液的活性（配置條件、低溫保存時間長短、是否反復凍融，解凍后的存放時間及溫度等）、消化細胞時的溫度（建議在37°培養(yǎng)箱中消化）、胰酶所加的量（以T25 為例，一個T25 加1ml 胰酶）、細胞的密度（同株細胞不同密度下胰酶對細胞的消化時間也不同，密度稀消化時間快，密度大消化時間相對較慢）等。不同細胞對胰酶的敏感性也不同，對于新購買的細胞，建議客

戶用含0.25EDTA 的胰酶消化液先培養(yǎng)箱持續(xù)消化1-2min，鏡下觀察細胞是否變圓，直至細胞*脫落或者輕拍瓶壁*脫落。記錄*佳消化時間， 下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。

9.客戶收到細胞時無異常，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如貼壁細胞密度未超過85%則繼續(xù)培養(yǎng)，超過85%時，請按照細胞使用說明書進行傳代培養(yǎng)；如為懸浮細胞和半懸浮細胞，具體操作請按照細胞使用說明書進行操作。

10.我們公司細胞株所使用的胎牛血清為進口胎牛血清貨號0500（Sciencell 公司）或ZQ500-A，胰酶消化液貨號0103（Sciencell 公司），細胞凍存液貨號0133（Sciencell公司），胰酶終止液0113（Sciencell 公司）。

11.我們公司認為細胞購買者或使用者均有細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，客戶收到細胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以重新收集使用（僅適用于近距離運輸?shù)目蛻簦?。在次消化傳瓶時，我們建議客戶留部分細胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，另外一部分細胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液培養(yǎng)，這樣可減少由于細胞不適應培養(yǎng)環(huán)境而導致的細胞培養(yǎng)問題，并且能對細胞的培養(yǎng)環(huán)境做出對比。如果兩組細胞的生長速度和細胞狀態(tài)無明顯變化，客戶可繼續(xù)培養(yǎng)擴增，如果兩組細胞在生長速度和細胞狀態(tài)上有微妙或明顯的變化，那么我們建議客戶需要更換更好的血清培養(yǎng)細胞。