購(gòu)買細(xì)胞處理方法和注意事項(xiàng)

*客戶收到細(xì)胞后請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀細(xì)胞注意事項(xiàng)及細(xì)胞使用說(shuō)明書，確保細(xì)胞的培養(yǎng)條件一致及售后服務(wù)判定標(biāo)準(zhǔn)。

我們公司貼壁細(xì)胞的常規(guī)運(yùn)輸方式是將細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的*培養(yǎng)液并封好瓶口進(jìn)行運(yùn)輸。冬季溫度比較低的情況下，我們會(huì)根據(jù)收貨人所在省份的平均溫度高低和距離采取對(duì)細(xì)胞不同狀態(tài)下發(fā)貨，包括活細(xì)胞瓶裝發(fā)貨、活細(xì)胞胰酶消化離心后血清發(fā)貨、凍存管發(fā)貨。客戶收到細(xì)胞后請(qǐng)嚴(yán)格按照以下要求進(jìn)行操作。

1.客戶在收到瓶裝細(xì)胞后，先觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，培養(yǎng)液是否混濁，若出現(xiàn)破裂、滲液、培養(yǎng)液混濁等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后的當(dāng)天與我們的銷售或技術(shù)支持聯(lián)xi，我們會(huì)及時(shí)處理

2.細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的*培養(yǎng)液(內(nèi)含細(xì)胞培養(yǎng)的血清含量和雙抗)，封好瓶口是我們正常運(yùn)輸細(xì)胞的方法。細(xì)胞出庫(kù)前都是處于無(wú)菌狀態(tài)，并且生長(zhǎng)良好，我們也會(huì)對(duì)出庫(kù)細(xì)胞進(jìn)行拍照留檔。（建議客戶在收到我們的細(xì)胞時(shí)將培養(yǎng)液拍張照片，觀察培養(yǎng)液的顏色以及是否漏液，觀察細(xì)胞時(shí)請(qǐng)拍100X、200X 各2-3 張照片進(jìn)行留存，方便后期細(xì)胞狀態(tài)的對(duì)比，拍攝的照片應(yīng)當(dāng)清晰。）

3.客戶在收到貼壁瓶裝細(xì)胞后不開(kāi)封，先將培養(yǎng)瓶外表面用75%酒精擦拭干凈， 鏡檢細(xì)胞貼壁情況。若貼壁良好，請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開(kāi)啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過(guò)火，再將多余培養(yǎng)液抽出進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng)，或直接進(jìn)行

細(xì)胞傳代(消化、傳代步驟詳見(jiàn)細(xì)胞使用說(shuō)明書)；若貼壁細(xì)胞有部分細(xì)胞懸浮，請(qǐng)先將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開(kāi)啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過(guò)火，將培養(yǎng)液抽出，依次離心(1000rmp 5min)將懸浮細(xì)胞收集后放回原瓶進(jìn)行過(guò)夜培養(yǎng)，并次日觀察貼壁情況。如細(xì)胞仍不能貼壁， 請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，證實(shí)細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)將細(xì)胞拍照(多倍數(shù)多視野) 及染色照片發(fā)送至技術(shù)支持的you箱，我們會(huì)盡快處理。(以上僅為貼壁細(xì)胞處理方法)。

4.客戶在收到懸浮瓶裝細(xì)胞后不開(kāi)封，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開(kāi)啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過(guò)火，將整瓶細(xì)胞懸液分別離心(1000rmp 5min)后收集于離心管中，視其離心后的細(xì)胞量進(jìn)行放回培養(yǎng)或分瓶培養(yǎng)。(以上僅為懸浮細(xì)胞處理方法)。

5.客戶在收到半懸浮瓶裝細(xì)胞后不開(kāi)封，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2H 后拿出，瓶蓋開(kāi)啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過(guò)火， 將整瓶細(xì)胞懸液中的上層懸浮細(xì)胞離心(1000rmp 5min)

后收集于離心管中，重懸細(xì)胞后放回原瓶與貼壁細(xì)胞共同培養(yǎng)至傳代。重懸上層懸浮細(xì)胞時(shí)必須保持下層貼壁細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)條件，防止貼壁細(xì)胞缺乏營(yíng)養(yǎng)。(以上僅為半懸浮細(xì)胞處理方法)。

6.若客戶收到1.8ml 離心管常溫細(xì)胞，收到細(xì)胞后觀察是否管裂、漏液、污染， 若有以上任何一種現(xiàn)象，請(qǐng)立即拍照后聯(lián)xi我們。若無(wú)以上現(xiàn)象，請(qǐng)用75% 酒精對(duì)離心管進(jìn)行消毒后放到操作臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，過(guò)火打開(kāi)管蓋，將管中的血清細(xì)胞輕輕吹

打幾下， 取出后放入15ml 離心管中， 加入雙倍或3 倍的*培養(yǎng)液1000rmp/5min離心，棄上清重懸后與對(duì)應(yīng)的*培養(yǎng)液混勻，加入到培養(yǎng)瓶中過(guò)夜培養(yǎng)，第二天觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度。若密度未達(dá)85%則繼續(xù)培養(yǎng)， 若達(dá)85%以上則可直接進(jìn)行傳代。

收到細(xì)胞過(guò)夜培養(yǎng)24h 后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或者狀態(tài)不佳，必須在發(fā)現(xiàn)問(wèn)題的當(dāng)天即刻向我們銷售人員反饋。(以上僅為血清運(yùn)輸細(xì)胞處理方法)。

7.若客戶收到凍存管細(xì)胞，請(qǐng)盡快復(fù)蘇。復(fù)蘇方法：1、37°水浴晃動(dòng)直至融化（不要超過(guò)一分鐘），移至15ml 離心管，另加入3-5 倍*培養(yǎng)液，1000rmp

5min，棄上清，放入25cm2 瓶中培養(yǎng)，第二天拍照留存有效信息。2、37°水浴晃動(dòng)直至融化（不要超過(guò)一分鐘），直接放進(jìn)加有6-8ml 培養(yǎng)基的25cm2 瓶中培養(yǎng)，16 小時(shí)之后必須換液并拍照留存有效信息。

8.傳代注意事項(xiàng)
胰酶消化的過(guò)程至關(guān)重要。消化過(guò)度細(xì)胞會(huì)粘連拉絲，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性和后期狀態(tài)；消化不*則細(xì)胞難以從瓶壁自行脫落，反復(fù)對(duì)細(xì)胞表面進(jìn)行吹打會(huì)損傷細(xì)胞活性，導(dǎo)致細(xì)胞后期狀態(tài)差、增值能力低下以及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。影響消化的因素有很多，主

要包括胰酶溶液的活性（配置條件、低溫保存時(shí)間長(zhǎng)短、是否反復(fù)凍融，解凍后的存放時(shí)間及溫度等）、消化細(xì)胞時(shí)的溫度（建議在37°培養(yǎng)箱中消化）、胰酶所加的量（以T25 為例，一個(gè)T25 加1ml 胰酶）、細(xì)胞的密度（同株細(xì)胞不同密度下胰酶對(duì)細(xì)胞的消化時(shí)間也不同，密度稀消化時(shí)間快，密度大消化時(shí)間相對(duì)較慢）等。不同細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感性也不同，對(duì)于新購(gòu)買的細(xì)胞，建議客

戶用含0.25EDTA 的胰酶消化液先培養(yǎng)箱持續(xù)消化1-2min，鏡下觀察細(xì)胞是否變圓，直至細(xì)胞*脫落或者輕拍瓶壁*脫落。記錄*佳消化時(shí)間， 下一次操作參考之前的記錄來(lái)控制時(shí)間即可。

9.客戶收到細(xì)胞時(shí)無(wú)異常，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如貼壁細(xì)胞密度未超過(guò)85%則繼續(xù)培養(yǎng)，超過(guò)85%時(shí)，請(qǐng)按照細(xì)胞使用說(shuō)明書進(jìn)行傳代培養(yǎng)；如為懸浮細(xì)胞和半懸浮細(xì)胞，具體操作請(qǐng)按照細(xì)胞使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。

10.我們公司細(xì)胞株所使用的胎牛血清為進(jìn)口胎牛血清貨號(hào)0500（Sciencell 公司）或ZQ500-A，胰酶消化液貨號(hào)0103（Sciencell 公司），細(xì)胞凍存液貨號(hào)0133（Sciencell公司），胰酶終止液0113（Sciencell 公司）。

11.我們公司認(rèn)為細(xì)胞購(gòu)買者或使用者均有細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，客戶收到細(xì)胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以重新收集使用（僅適用于近距離運(yùn)輸?shù)目蛻簦?。在次消化傳瓶時(shí)，我們建議客戶留部分細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，另外一部分細(xì)胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液培養(yǎng)，這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境而導(dǎo)致的細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，并且能對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境做出對(duì)比。如果兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和細(xì)胞狀態(tài)無(wú)明顯變化，客戶可繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增，如果兩組細(xì)胞在生長(zhǎng)速度和細(xì)胞狀態(tài)上有微妙或明顯的變化，那么我們建議客戶需要更換更好的血清培養(yǎng)細(xì)胞。