培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
GSK1904529A是IGF-1R和IR的選擇性抑制劑,IC50分別為27nM和25nM,對(duì)Akt1/2,Aurora A/B,B-Raf,CDK2,EGFR的抑制性相對(duì)較弱。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1089283-49-7 純度:98.97% 分子量:851.96 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
黑色附球菌Serratia rubidaea
德布爾有孢酵母Shewanella algae
產(chǎn)紅青霉Shewanella aquimarina
中慢生華癸根瘤菌Shewanella loihica
奇異球菌Shewanella fidelis
枯草芽孢桿菌Shewanella haliensis
野油菜黃單胞菌Shewanella loihica
米曲霉Shewanella marinintestina
克魯斯假絲酵母Shewanella pneumatophori
巴氏醋桿菌巴氏亞種Shewanella sairae
寬雄腐霉*Shewanella schlegeliana
大豆慢生根瘤菌Shewanella schlegeliana
酵母菌y2hgoldShewanella schlegeliana
香菇Shigella boydii
雞白痢沙門氏菌Silvimonas amylolytica
中華根霉Shigella flexneri
小鼠維生B6(VB6)免疫試劑盒光激A相互作用蛋白1抗體人黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒葫蘆D
小鼠維生B12(VB12)免疫試劑盒載脂蛋白樣蛋白6抗體人黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒葫蘆E
小鼠維生A(VA)免疫試劑盒凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體人癌易感蛋白2(BRCA-2)ELISA試劑盒槲皮苷
小鼠微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)免疫試劑盒A2LD1蛋白抗體人癌易感蛋白2(BRCA-2)ELISA試劑盒槲皮
IGF-1R和IR抑制劑(GSK1904529A)DL-鄰氯甘
其他DL-2-氯甘;混旋鄰氯甘
英文名稱:DL-2-(2-Chlorophenyl)glycine
其他英文名稱:DL-2-Amino-2-(2-chlorophenyl)acetic acid
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):141196-64-7
C8H8ClNO2=185.61
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%
熔點(diǎn):197~203℃
性狀:結(jié)晶粉末。沸點(diǎn)91~94℃
用途:生化研究
保存:RT