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詳細介紹
中文名稱：BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒
英文名稱：BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit
產品規(guī)格：共100ml
發(fā)貨周期：1～3天
BCIP/NBT 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導多功能干細胞iPS 鑒定等的試劑盒。 BCIP/NBT 是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP 會被水解產生強反應性的產物，該產物會和NBT 發(fā)生反應，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan。 本試劑盒可以用于細胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導多功能干細胞iPS 的鑒定，也可以用于Western 等結合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內源性的堿性磷酸酯酶顯色。 |
組份規(guī)格：
試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 100ml
試劑B：BCIP 溶液(300X) 350μl
試劑C：NBT 溶液(150X) 700μl
使用說明
1. 對于組織切片或細胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。對于檢測內源性堿性磷酸酯酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也用適當洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。
2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B：BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積：3.03mL
3. 后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT 染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長時間(可長達24 小時)，直至顯色至預期深淺。
5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應。
6. 對于組織切片或細胞樣品，顯色反應終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應終止后，可以室溫晾干避光保存。
儲存：4℃，有效期一年。
注意事項：
1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
制霉菌（標準品）英文名稱： Sodium chloride鐵螯合抗體包裝1g
制霉（標準品）英文名稱： Guanidine hydrochlorideDH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體包裝1g
重長春瑞賓(標準品)英文名稱： Adonitol磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體包裝5g
重腎上腺（標準品）英文名稱： Yeast extract上皮粘附分子抗體包裝1g
周效磺(標準品)英文名稱： RNase A Solution酪蛋白激受體B2抗體包裝5g
注射用益氣復脈隨行對照品(暫行)英文名稱： D-Glucose, monohydrate表皮生長因子抗體包裝1g
壯觀霉(標準品)英文名稱： SDS表皮生長因子受體3抗體包裝5g
子囊霉（標準品）英文名稱： PEG 6000酪蛋白激A4受體抗體包裝1g
組(標準品）英文名稱： Tween 20上皮鈣粘附分子抗體包裝5g
左卡尼?。藴势罚┯⑽拿Q： Triton X-100紅生成受體抗體包裝1g
左羥哌（標準品）英文名稱： Tryptone腦啡肽抗體包裝5g
左旋地平/磺左旋地平（標準品）英文名稱： D-BiotinEID2蛋白抗體包裝25ml
左旋奧沙利鉑（奧沙利鉑雜質D）（標準品）英文名稱： Glycerol上皮粘附分子抗體包裝500ml
左旋(標準品)英文名稱： Sodium citrate, trisodium salt, dehydrate紅膜相關蛋白ERMAP抗體包裝100g
左氧沙星（標準品）英文名稱： Gelatin腺樣癌特異性相關抗原EMC1抗體包裝500g
竹瘤座菌Balansia│take (Miyake) Hara 質量規(guī)格：含量98.0-102%,I型糖蛋白130試劑盒三七總皂苷;Panax notogins
纖細白僵菌Beauveria│brongniartii (Sacc.) Petch 質量規(guī)格：>98%,USP32羰基還原[NADPH] 1試劑盒SN-38;7-Ethyl-10-Hyd
禽分枝桿菌Mycobacterium│avium 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品碳酐9試劑盒楊苷;Salicoside
BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒小麥胚芽粉
英文名稱： Wheat gern powder
產品規(guī)格： BR
包裝：500克
CAS號：68917-73-7
級別：BR
粗蛋白含量（干基）：≥30%
脂肪含量：≤1.5%
水分：≤12%
性狀：淺黃色粉末。
用途：生化研究。
保存：RT
操作規(guī)程：
1、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
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