人胰腺腫瘤成纖維細胞永生化

人胰腺腫瘤成纖維細胞永生化公司正在出售的產(chǎn)品：人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat，CloneE6-1 (STR鑒定正確)小鼠肺癌細胞紅色熒光LLC+RFP（種屬鑒定）人骨肉瘤細胞帶熒光143B+LUC(STR鑒定正確)小鼠海馬神經(jīng)元細胞 HT22（種屬鑒定）小鼠肺泡上皮細胞 MLE-12（種屬鑒定）小鼠腎小球系膜細胞SV40-MES-13 （種屬鑒定）非洲綠猴腎細胞CV-1（種屬鑒定）

一、細胞基本屬性

細胞詳述

癌組織由實質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細胞構(gòu)成癌實質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實質(zhì)的作用，不具有特異性。

當實體瘤超過1-2mm時，需要通過新生的血管和活化的癌相關(guān)成纖維細胞來獲取癌細胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關(guān)成纖維細胞可通過分泌多種細胞因子和生長因子來發(fā)揮促進癌血管生成的作用。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也能觀察到相似的EMT過程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直接決定腫瘤的發(fā)生發(fā)展。多種因素可影響該界面，其中癌相關(guān)成纖維細胞是數(shù)量豐富的基質(zhì)細胞，在調(diào)節(jié)腫瘤細胞EMT過程中發(fā)揮重要作用。它通過細胞與細胞間相互接觸及分泌各種細胞因子、蛋白酶類等，促進上皮細胞及其細胞惡性轉(zhuǎn)化，并對界面各組分產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細胞。

細胞特性

1） 細胞來源于人手術(shù)胰腺癌組織。

2） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

3） 細胞生長方式：長梭形，貼壁培養(yǎng)。

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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