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詳細(xì)介紹
中文名稱：Caspase 9 活性檢測試劑盒
英文名稱：Caspase 9 Activity Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格：20次|100次
發(fā)貨周期：1～3天
本試劑盒是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中caspase 9酶活性或純化的caspase 9酶活性的試劑盒。 Caspase是一個在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6，有時被寫作caspase-9或caspase 9，是細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個caspase。線粒體釋放細(xì)胞色素以后，caspase 9可以和細(xì)胞色素以及Apaf1形成復(fù)合物，同時被激活。激活的caspase 9可以激活細(xì)胞凋亡的最關(guān)鍵酶caspase 3，從而促進(jìn)后續(xù)的細(xì)胞凋亡信號。Caspase 9的激活可以通過磷酸化進(jìn)行調(diào)控。 本Caspase 9活性檢測試劑盒是基于caspase 9可以催化底物Ac-LEHD-pNA(acetyl-Leu-Glu-His-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 9的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。 |
試劑盒中提供了caspase 9催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 9酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。
試劑盒組分：
裂解液——————8ml
檢測緩沖液——————8ml
Ac-LEHD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
儲存條件：-20℃
注意事項(xiàng)：
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
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Caspase 9 活性檢測試劑盒植酸鈉
其他 肌醇六磷酸鈉；六磷酸環(huán)己六醇鈉鹽；環(huán)己六醇六磷酸鈉鹽
英文名稱： Phytic acid sodium salt hydrate
其他英文名稱： Inositol hexaphosphoric acid sodium salt；Sodium phytate
產(chǎn)品規(guī)格： 高純，98%
包裝：100克/500克
CAS號：14306-25-3
C6H18O24P6 • xNa+ • yH2O=660.04 (anhydrous free acid basis)
級別：Hig purity grade
含量：≥98.0%
氯化物：≤0.02%
重金屬：≤0.003%
性狀：或灰粉末。有吸濕性。溶于水，水溶液呈中性。
用途：生化研究。微量重金屬的絡(luò)合劑。金屬除去劑。
保存：RT
操作規(guī)程：
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000～0000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
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