注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腺病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號:FS-P013564
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
Human Calreticulin,CRT ELISA Kit 人鈣網(wǎng)蛋白Multi-class antibodies: 48T
SM-MHC 心肌肌凝蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Mouse IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.1ml
HO-1(Mouse heme oxygenase 1) ELISA Kit 小鼠血紅氧合1
NT5C1A 胞質(zhì)5'核苷1A抗體 0.2ml
beta-Amyloid (1-42) β淀粉樣肽(1-42)單克隆抗體 0.1ml
SM-MHC 心肌肌凝蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
MAO(Human monoamine oxidase) ELISA Kit 人單胺氧化Multi-class antibodies: 48T
P95/NBS1 DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-6 白介6抗體 0.1ml
MMP-2/Gelatinase A ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A 96T
PROK1/PRK1/EG-VEGF 腺衍生血管內(nèi)皮生長因子抗體 0.1ml
CACH2 L型鈣通道蛋白抗體 0.1ml
P95/NBS1 DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Donkey Goat IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml
GLEPP1 腎小球上皮蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB4 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族4抗體 0.2ml
HSP-90 Beta/FITC 熒光標(biāo)記HSP-90β蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
PKA/FITC 熒光標(biāo)記蛋白激A抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
腺病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒50次Sphingomonasyantingensis種屬: Sphingomonasyantingensis分離基物: 紫色土安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 102生長條件: 30℃
米根霉種屬: RhizopusoryzaeWentetPrinsen-Geerligs安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)乳和糖化培養(yǎng)基: 17,77生長條件: 28-30℃
羅氏耶爾森氏菌種屬: Yersinia│rohdei提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
北京諾卡氏菌種屬: Nocardia│beijingensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0234生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
E3泛蛋白連接TRIM68(TRIM68)ELISA試劑盒AR,99.5%反,反-2,4-庚二烯 90%加拿大香脂
D-乳脫氫(D-LDH)ELISA試劑盒CP,99.5%三硫酮 ≥99%, FG正己(>98%,BR)
D二聚體(D2D)ELISA試劑盒GR,99.8%4-羥基-3-甲氧基甲 98%己內(nèi)酰(>98%,BR)
DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子4樣蛋白(DDIT4/RTP801)ELISA試劑盒PT,99.8%六酮 99%羧肽 Y >50 U /mg
DNA甲基轉(zhuǎn)移3A(DNMT3A)ELISA試劑盒光譜級2-異基-4-甲基噻唑 98%蓖麻油
DNA甲基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)ELISA試劑盒用于和昆蟲培養(yǎng),≥99.5% (T)3-甲基-1-丁硫 97%1,1-環(huán)己基二乙
DnaJ同源亞科B成員1(DNAJB1/DNAJ1/HDJ1/HSPF1)ELISA試劑盒for HPLC, ≥99.5% (AT)甜瓜 80%反式-1,2-環(huán)己二四乙(>98%,BR)
Dickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)ELISA試劑盒用于植物培養(yǎng), ≥99.5%2-甲基庚 98%乙纖維
Dickkopf 3(DKK3)ELISA試劑盒USP香草甲酯 99%乙鈰(>99%,BR)
Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒≥99.999% (metals basis)4-甲硫基-4-甲基-2-戊酮 99%硫鈰四(>99%,BR)
DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA試劑盒農(nóng)殘級, ≥99.5%4-甲基-4-巰基-2-戊酮 98%碳銫(>99%,BR)
C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒用于分子生物學(xué), ≥99.5% (AT)3-甲硫基-1-己 99%滂天藍(lán)(~50%,BS)
C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒99.99% metals basis3-巰基-1-己 98%銨-T三(>98%,BR)
C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒化 GR,99.8%3-甲基-2--1-硫 98%卡拉唑黑E(>70%,BS)
C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒化 AR,99.5%2-甲基-3-呋喃硫 95%金三
C多肽(CP)ELISA試劑盒化 CP,99.5%2-甲基四-3-硫 97%鉑六