操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):CCCP細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑(50mM)
英文名稱(chēng):Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone
產(chǎn)品規(guī)格:100ul
發(fā)貨周期:1~3天
CCCP是一種質(zhì)子載體(H+ ionophore),強(qiáng)效的線(xiàn)粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑,促使線(xiàn)粒體內(nèi)膜對(duì)H+產(chǎn)生通透性,導(dǎo)致線(xiàn)粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失,誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜,抑制光合作用;CCCP還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體(ER-Golgi)之間的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn),高親和力結(jié)合細(xì)胞色素氧化酶。 |
CAS號(hào):555-60-2
分子式:C9H5ClN4
分子量:204.62
儲(chǔ)存條件:-20℃保存
純度:≥97% (TLC)
CCCP還具有其他功能:
1)在牛蛙交感神經(jīng)方面的實(shí)驗(yàn)表明,CCCP 可增強(qiáng)促黃體生成素釋放激素的釋放;
2)作為一種質(zhì)子導(dǎo)體在葡萄糖存在的情況下影響E.coli 細(xì)胞活性;
3)對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣水平的各種調(diào)節(jié)效應(yīng);
4)抑制脂肝酶的分泌;
5)部分抑制pH梯度活化的Cl-攝取以及刷狀緣膜的Cl-/Cl-交換等。
本品是溶于DMSO的CCCP溶液,濃度為50mM,體積為100μl(相當(dāng)于1mg的總量),常用作一種陽(yáng)性對(duì)照來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并配合線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)探針JC-10(貨號(hào):J8050)來(lái)進(jìn)行相關(guān)研究。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
白介15(IL15)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL15 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框103抗體包裝100g
白介13受體α2(IL13Rα2)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL13Rα2 ELISA Kit兒茶酚O基移位抗體包裝25g
白介13(IL13)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL13 ELISA Kit補(bǔ)體C1qTNF9鏈多肽抗體包裝5g
白介12B(IL12B)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL12B ELISA Kit平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體包裝1g
白介12A(IL12A)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL12A ELISA Kit心肌病相關(guān)蛋白2包裝5g
白介11受體α(IL11Rα)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL11Rα ELISA Kit5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框34抗體包裝100g
白介11(IL11)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL11 ELISA KitE1A激活基因激蛋白1抗體包裝25g
白介10(IL10)elisa試劑盒英文名稱(chēng):IL10 ELISA Kit2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體包裝5g
八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)elisa試劑盒英文名稱(chēng):OCT4 ELISA Kit豬瘟病抗體包裝1g
酰tRNA合成復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)elisa試劑盒英文名稱(chēng):AIMP1 ELISA Kit3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體包裝5g
基己糖苷Bβ(HEXβ)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HEXβ ELISA Kit2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體包裝5g
基己糖苷Aα(HEXα)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HEXα ELISA Kit豬瘟病抗體包裝5g
基端前心鈉肽(NT-ProANP)elisa試劑盒英文名稱(chēng):NT-ProANP ELISA Kit中心體蛋白110抗體包裝1g
基端前腦鈉(NT-ProBNP)elisa試劑盒英文名稱(chēng):NT-ProBNP ELISA Kit纖維包裝5g
阿黑皮原(POMC)elisa試劑盒英文名稱(chēng):POMC ELISA Kit分裂周期蛋白14B抗體包裝10ml
酮假單胞菌Pseudomonas│testosteroni 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M試劑盒鹽葫蘆巴堿;Trigonelline
金黃色葡萄球菌Staphylococcus│aureus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒鹽石蒜堿;Lycorine hydro
疣孢青霉Penicillium│verruculosum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分,sigma E1383 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒雅姆皂苷元 ;yamogenin
CCCP細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑(50mM)胰粉
其他胰;胰酵;胰;胰液;胰消化;胰腺
英文名稱(chēng):Pancreatin
其他英文名稱(chēng):Pancreatin from hog pancreas
產(chǎn)品規(guī)格:BR,1:4000
包裝:500克/100克
CAS號(hào):8049-47-6
級(jí)別:BR
分子量:約23400
效價(jià):1:4000
活力:≥4000u/g
胰淀粉活力:≥30000u/g
分子量:23300~23800
效價(jià):1:250
活力:≥250 USP u/mg(等于1000 BAEE u/mg)
干燥失重:≤4.8%
級(jí)別:USP級(jí)
效價(jià):1:2500
活力:≥2500 USP U/mg(等于10000 BAEE u/mg)
干燥失重:≤5.0%
糜蛋白:≤50u/mg
性狀:由牛胰提取而得的一種肽鏈內(nèi)切,粉末。溶于水,不溶于乙、甘油、。等電點(diǎn)pI 10.5。適pH值7.8~8.5左右,pH值2~3是穩(wěn)定的,pH值5以上易自溶失活,pH>9.0不可逆失活。Ca2+對(duì)活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制
用途:生化研究。專(zhuān)一性催化水解賴(lài)、精羧基形成的肽鍵,可用于蛋白質(zhì)化學(xué)研究
保存:2~8℃