中文名稱:膠原酶II型
英文名稱:Collagenase II
產(chǎn)品規(guī)格:100mg
發(fā)貨周期:1~3天
本品為II型膠原酶,≥125 U/mg solid,可用于心、甲狀腺、唾液腺、肝、骨、軟骨等組織和細(xì)胞的解離。本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,多糖和脂質(zhì),使得本品非常適用于組織消化。 |
膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內(nèi)切酶,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。
目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,分為四種類型:膠原酶I型,II型,III型和IV型,在應(yīng)用上有所偏向:
1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備;
2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備;
3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,常用于乳腺細(xì)胞的制備;
4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰島細(xì)胞的制備,或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。
酶活力單位定義
在37℃,pH7.5 的條件下,5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮氨酸的酶量定義為1個酶活力單位。
儲存條件:4℃,有效期兩年
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
舒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Omeprazole磷化CD19抗體包裝5g
替潑諾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Omeprazole著絲粒蛋白A包裝25g
維地平丁酯/丁維地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlorzoxazone磷化著絲粒蛋白A包裝5g
硝柳(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlorzoxazone磷化二氫嘧啶樣2抗體包裝100g
氧喹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-Glucosamine hydrochloride克拉拉蛋白抗體包裝25g
唑沙宗(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-Glucosamine hydrochlorideB淋巴粘附分子CD22抗體包裝5MG
羅司特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Droperidol組織蛋白G抗體包裝1g
羅紅霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Droperidol激分子B7-1蛋白抗體包裝5g
羅哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Mercaptopurine monohydrate1號染色體開放閱讀框145抗體包裝100ml
羅硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Paracetamol(Acetaminofen polvo)20號染色體開放閱讀框186抗體包裝25ml
蘿巴新(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Paracetamol(Acetaminofen polvo)角蛋白7抗體包裝500ml
螺內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Olaparib,AZD2281,KU0059436間隙連接蛋白26抗體包裝100ml
螺旋霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Quinidine膜輔蛋白抗體包裝500ml
洛伐他汀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Monolaurin/1-Lauroyl-rac-glycerolF肌動蛋白α1亞基抗體包裝250g
洛莫司汀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MonooleinCD8抗體包裝50g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:potency>765 µg of erythromycin (C37H67NO13) per mg,USP35色P450試劑盒脫穿心蓮內(nèi)酯;Dehydroandro
根瘤菌(紫云英)Mesorhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP/USP色c氧化亞基VIB多肽1試劑盒土貝母苷;Tubeimoside I
: ivcas7.00213資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品色c氧化亞基5B,線粒體試劑盒甜菜堿;Betaine
膠原酶II型亞硫基二乙
其他 硫代二乙;硫代二乙;硫代二甘;亞硫基二乙;硫代羥基乙;2,2'-硫代二乙
英文名稱: 2,2′-Thiodiacetic acid
其他英文名稱: 2,2′-Thio-bis(acetic acid), Dicarboxydimethyl sulfide;Thiodiglycolic acid
產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%
包 裝: 25克/100克/500克
CAS號:123-93-3
C4H6O4S=150.15
級別:BR
含量:≥98.0%(滴量滴定)
熔點(diǎn):128~131℃
干燥失重:≤0.5%
性狀:至淺黃色結(jié)晶, 溶于水,溶于,不溶于
用途:生化研究。
保存:RT
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)