詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腸出血性大腸桿菌O104PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-02R6334
產(chǎn)品規(guī)格:48T
產(chǎn)品分類:恒溫?zé)晒夥?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
TSGF ELISA Kit 大鼠特異生長因子/相關(guān)因子Multi-class antibodies: 48T
TSARG4 生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GHDC GHDC蛋白抗體 0.2ml
TSGF(Mouse Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor) ELISA KIT 小鼠特異生長因子/相關(guān)因子 96T
NDRG4 抑癌基因NDRG4抗體 0.2ml
ATPase Na+/ K+ beta 2 鈉鉀ATP通道蛋白抗體 0.1ml
TSARG4 生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
DR-70TM(Human tumor marker DR-70 for lung cancer) ELISA Kit 人肺癌標(biāo)志物DR-70Multi-class antibodies: 48T
membrane glycoprotein E(VZV) 人痘帶狀皰疹病毒gE蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MGAT5 糖蛋白GNTVA抗體 0.2ml
sAC(Human Soluble Adenylate Cyclase) ELISA Kit 人可溶性腺苷環(huán)化 96T
RNF160 環(huán)指蛋白160抗體 0.1ml
C5orf35 5號(hào)染色體開放閱讀框35抗體 0.2ml
membrane glycoprotein E(VZV) 人痘帶狀皰疹病毒gE蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit Bovine IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗IgM 0.1ml
GFI1 自主生長因子GFI1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACTBL1/Ovary 卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體 0.2ml
MCP-2/CCL8/FITC 熒光標(biāo)記單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(人)IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Bov IgG/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗IgG 0.1ml
rInsulin monoclonal (pig)/FITC 熒光標(biāo)記小鼠抗胰島單克隆抗體(豬)IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
腸出血性大腸桿菌O104PCR檢測(cè)試劑盒通用型南芥菜花葉病毒(Arabis Mosaic Virus;ArMV)20次豬Ⅰ型前膠原羧基端肽elisa檢測(cè)試劑盒
基因檢測(cè)試劑盒豬腎上腺elisa檢測(cè)試劑盒
通用型甜菜壞死黃脈病毒(Beet Necrotic Yellow Vein Virus; BNYVV)基因檢測(cè)試劑盒20次豬生長釋放多肽elisa檢測(cè)試劑盒價(jià)格
通用型越橘葉枯黃病毒(Blueberry Leaf Scorch Virus;BLSV)20次豬熱休克蛋白70elisa檢測(cè)試劑盒
基因檢測(cè)試劑盒豬白介2elisa檢測(cè)試劑盒
通用型黃瓜花葉病毒(Cucumber Mosaic Virus;CMV)20次豬促卵泡elisa檢測(cè)試劑盒
基因檢測(cè)試劑盒兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1elisa檢測(cè)試劑盒
通用型葡萄扇葉病毒(Grapevine Fanleaf Virus;GFLV)20次豬熱休克蛋白90elisa檢測(cè)試劑盒
基因檢測(cè)試劑盒兔子白介2elisa檢測(cè)試劑盒
通用型鳳仙花壞死斑病毒(Impatiens Necrotic Spot Virus;INSV)20次兔子組織因子elisa檢測(cè)試劑盒價(jià)格
基因檢測(cè)試劑盒兔抗糖蛋白抗體elisa檢測(cè)試劑盒
通用型萵苣(包心)花葉病毒(Lettuce Mosaic Virus;LMV)20次豬雌二醇受體elisa檢測(cè)試劑盒價(jià)格
基因檢測(cè)試劑盒兔子腫瘤壞死因子αelisa檢測(cè)試劑盒
通用型辣椒輕斑駁病毒(Pepper Mild Mottle Virus;PMMV)20次兔血清總補(bǔ)體elisa檢測(cè)試劑盒
基因檢測(cè)試劑盒兔環(huán)磷腺苷elisa檢測(cè)試劑盒價(jià)格
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。