產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-9 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-9 是級(jí)聯(lián)酶的上游分子,可被線粒體向細(xì)胞質(zhì)釋放的細(xì)胞色素 激活。激活的Caspase-9 可引起下游級(jí)聯(lián)酶的活性,如Caspase-3。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段時(shí)則被激活。Caspase-9 分光光度法檢測(cè)試劑盒就是將caspase-9 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán),當(dāng)該底物被caspase-9 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來,可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)(λ=405nm 或400nm)測(cè)定其吸光值,可考察caspase-9 的活化程度。 |
注意事項(xiàng)
1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。
2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機(jī)制,這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-9 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。
3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50-100mg,以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求,因?yàn)镃aspase-9 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的OD 值偏低,可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
白介素8(IL-8/CXCL8)elisa試劑盒英文名稱:IL-8/CXCL8 ELISA Kit載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體包裝500g
白介素8(IL-8)elisa試劑盒英文名稱:IL-8 ELISA Kit凋亡誘導(dǎo)因子3抗體包裝100g
白介素7(IL-7)elisa試劑盒英文名稱:IL-7 ELISA Kit凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體包裝25g
白介素6(IL-6)elisa試劑盒英文名稱:IL-6 ELISA Kit凋亡誘導(dǎo)蛋白D抗體包裝500g
白介素6(IL-6)elisa試劑盒英文名稱:IL-6 ELISA Kit性神經(jīng)鞘磷脂酶抗體包裝1g
白介素-5(IL-5)elisa試劑盒英文名稱:IL-5 ELISA Kit腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體包裝5g
白介素5(IL-5)elisa試劑盒英文名稱:IL-5 ELISA Kit肌側(cè)索硬化2染色體區(qū)域候選蛋白8抗體包裝1g
白介素4(IL-4)elisa試劑盒英文名稱:IL-4 ELISA KitATP酶H+轉(zhuǎn)運(yùn)溶酶體輔助蛋白2抗體包裝100g
白介素4(IL-4)elisa試劑盒英文名稱:IL-4 ELISA Kit肝素結(jié)合蛋白/陽離子抗菌蛋白37/天青殺素抗體包裝25g
白介素35(IL-35)elisa試劑盒英文名稱:IL-35 ELISA Kit核突觸蛋白抗體包裝100g
白介素33(IL-33)elisa試劑盒英文名稱:IL-33 ELISA Kitβ-肌動(dòng)蛋白/β-Actin 抗體(內(nèi)參抗體)包裝500g
白介素31(IL-31)elisa試劑盒英文名稱:IL-31 ELISA Kitβ淀粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗體包裝1g
白介素3(IL-3)elisa試劑盒英文名稱:IL-3 ELISA Kitβ淀粉樣肽1-16/Aβ1-16抗體包裝250mg
白介素2受體β(IL2rb/CD122)elisa試劑盒英文名稱:IL2rb/CD122 ELISA Kitβ淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28抗體包裝1g
白介素2受體(IL-2R)elisa試劑盒英文名稱:IL-2R ELISA Kit激活素受體2A抗體包裝250mg
膜粘連蛋白11抗體基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)J-147是一種廣譜神經(jīng)保護(hù)活性基酰肼化合物(EC50= 60-115nM)。
Caspase 9分光光度法檢測(cè)試劑盒玉米淀粉
其他玉蜀黍淀粉;六谷粉
英文名稱:Corn starch
其他英文名稱:Starch from corn
產(chǎn)品規(guī)格:CP,99.5%
包裝:500克
CAS號(hào):9005-25-8
分子式:(C6H10O5)n
級(jí)別:CP
含量:≥99.5%
水分:≤14.0%
度:≤1.8
灰分:≤0.15%
性狀:粉末,有吸濕性。易溶于水。水溶解性:100mg/ml
用途:生化研究。異檸檬脫氫酶底物
保存:RT,避光
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。