CCK-8試劑盒

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大鼠高鐵血紅蛋白黃藤Human, Mouse
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弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法)黃鐘花醌;拉帕 (標準品)Human, Mouse
弓形蟲抗體 IgM(捕獲法

中文名稱：CCK-8試劑盒

英文名稱：Cell counting KIT-8

產(chǎn)品規(guī)格：100T|500T|500T*10

發(fā)貨周期：1～3天

使用說明：

一、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量時)

1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。

2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X 軸)，OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。)

二、細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(在37℃,5% CO2的條件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù))。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

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大腸埃希菌Escherichia│coli 質量規(guī)格：HPLC>99%,標準品異質性胞核核糖核蛋白A3試劑盒α-亞麻;alpha-Linoleni

黃曲霉Aspergillus│flavus 質量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)異質性胞核核糖核蛋白A2/B1試劑盒乙龍腦酯;Bornyl acetate
CCK-8試劑盒（豬胰）

英文名稱：Trypsin(porcine pancreas)

產(chǎn)品規(guī)格：BR，1：250

包裝：100克/500克/25克

產(chǎn)品規(guī)格：組織培養(yǎng)級，1：300

包裝：50克/250克

CAS號：9002-07-7

分子量：23300

級別：BR

效價：1：250

活力：≥250U/mg

干燥失重：≤5.0%

級別：Tissue culture grade

性狀：類淡黃色粉末。適溫度35～37℃。反應：甘油三酯+H2O＝甘油二酯+脂肪陰離子。對一級酯基團易水解。甘油單酯是差的底物。有兩個差不多相同的同工脂肪： A與B。等電點(pI)A為4.9、 B為5.0。吸光系數(shù)(E1%280)13.3。激活劑為鈣(CA2+)。

用途：生化研究。定量分析血清中甘油三酯。前列腺脂的分析。脂肪分析。用于水解酯鍵1，3位，分解脂肪成甘油和脂肪

保存：2～8℃

操作規(guī)程：

1、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)