EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY1002圖片

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY1002圖片公司專業(yè)代理ATCC以及國家保藏機(jī)構(gòu)提供的細(xì)胞，品系多樣，我司擁有專業(yè)的科研人員長期進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和相關(guān)實驗，現(xiàn)已掌握各類細(xì)胞生長特性和生長條件。具體的說明書和價格可咨詢我司索取。

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY1002圖片本公司專業(yè)代理ATCC細(xì)胞，提供售前售后服務(wù)，若要獲取詳細(xì)的說明書或價格信息，請。
細(xì)胞名稱  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY1002圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣

生長特性 懸浮生長

特征特性 該細(xì)胞系來源于一無精癥男性的外周血。2010年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS

傳代方法 1：

2傳代；5-6天一次  

傳代情況 P3

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 熒光法（-）　

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

操作流程：

※主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡），co2孵箱。
※細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
  ?細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
  ?細(xì)胞傳代:原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
  ?細(xì)胞形態(tài)的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
  ?生長曲線:取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
  ?細(xì)胞的貼壁率:指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
   ?細(xì)胞的計數(shù):常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。

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