培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
SYTOX 綠色死細(xì)胞核酸染料( Ex/Em: 502/525 nm, bound to DNA)是一種可輕易穿過(guò)受損細(xì)胞質(zhì)膜而不能透過(guò)活細(xì)胞質(zhì)膜的綠色核酸染料,其在于核酸結(jié)合之后熒光強(qiáng)度會(huì)得到超過(guò)500 倍的顯著增強(qiáng)。SYTOX 綠色死細(xì)胞核酸染料可以用于染死的真核細(xì)胞的RNA和DNA,在革蘭氏細(xì)菌中同樣也適用。使用者可以利用氬激光激發(fā)器的488nm(或者其他任何帶有450-490nm 激發(fā)光源的激發(fā)器)激發(fā)染料。 |
SYTOX 綠色死細(xì)胞核酸染料可用于多色熒光分析,在不同的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中染固定細(xì)胞的核酸,如,熒光顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀,流式細(xì)胞儀上。
儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期6個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
扁蓄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Iohexol口蹄疫病A型抗體(N端)包裝25g
表白樺脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Maltose Phosphorylase 5U/mg腎刷狀緣抗體包裝500g
表兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MetribuzinFLAG Tag標(biāo)簽抗體(N端)包裝5g
表兒茶沒(méi)食子酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MU-alpha-GALFAM166A蛋白抗體包裝100g
表告依春(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mucic acid脂肪合成抗體包裝25g
表戈米辛O(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Naphthol AS-MX phosphate腦型脂肪結(jié)合蛋白抗體(C端)包裝5g
表沒(méi)食子兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Potassium oxalate, monohydrate磷化纖維束蛋白同源物1抗體包裝1g
表沒(méi)食子兒茶沒(méi)食子酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium bitartrate, monohydrate粘著斑激抗體包裝5g
表木栓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium sulfate, decahydrate凝血因子5抗體包裝100mg
表小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Span* 40成纖維生長(zhǎng)因子10抗體包裝1g
別隱品堿;A-別隱品堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tyramine hydrochlorideXIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體包裝250mg
濱蒿內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Furoic acid羊抗人纖維蛋白原抗體包裝1g
檳榔(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-MethylimidazoleFas活化激結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝250mg
檳榔花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-ChloropurineF-box蛋白38抗體包裝100g
波棱瓜子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Big CHAPFK506結(jié)合蛋白38抗體包裝25g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品嗜伊紅顆粒主要堿性蛋白試劑盒七葉皂苷 IIa;Escin IIa
暗灰鏈霉菌Streptomyces│canus 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR嗜性粒陽(yáng)離子蛋白試劑盒七葉皂苷 Ib;Escin Ib
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品嗜粒趨化蛋白Eotaxin 2試劑盒七葉皂苷 Ia;Escin Ia
死細(xì)胞核酸染料-綠菁SYTOX芴甲氧羰基-S-乙酰甲基-L-半胱
其他Na-芴甲氧羰?;?S-(乙?;?甲基)-L-半胱;FMOC-S-乙酰甲基-L-半胱
英文名稱:Nα-Fmoc-S-acetaminomethyl-L-cysteine
其他英文名稱:Fmoc-Cys(Acm)-OH
產(chǎn)品規(guī)格:特純,98%
包裝:5克/25克/100克
CAS號(hào):86060-81-3
C21H22N2O5S=414.47
級(jí)別:Purum
含量:≥98.0%
熔點(diǎn):145~150℃
性狀:粉末
用途:生化研究
保存:2~8℃