培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
快速瑞氏染液 |
| 250ml×3 | 1~3天 |
商品介紹:
瑞氏染液主要應(yīng)用于血液和骨髓涂片染色。 |
操作步驟
1. (選做)平置血涂片于染色架上,滴加甲醇固定液,室溫固定15-30 分鐘。
2. 吸去固定液,室溫通風(fēng)晾干。
3. 將試劑一滴加到載玻片上,均勻覆蓋住載片上血細(xì)胞,染色時間約為1 分鐘。等染液有變紅的趨勢時,迅速滴加兩倍試劑一的量的試劑二。繼續(xù)染色5 到8 分鐘。
4. 小股水流洗片,防止將大量的細(xì)胞從載片上沖落下來從而影響以后的觀察。30s 水洗結(jié)束后將載片放到陰涼處風(fēng)干。
5. 顯微鏡鏡檢。
染色結(jié)果
1. 紅細(xì)胞呈淺紅色,中央稍淡而略有蝶形態(tài)。
2. 白細(xì)胞系統(tǒng)清晰易分,細(xì)胞膜清晰呈紫黑色,細(xì)胞核著色呈深淺不同的紫紅色,胞漿中各種顆粒區(qū)分明顯。其中中性粒細(xì)胞漿中顆粒呈淡紫紅色,嗜酸粒細(xì)胞漿中顆粒呈桔紅色、嗜堿性粒細(xì)胞胞漿中顆粒呈藍(lán)褐色。單核細(xì)胞的胞漿呈灰藍(lán)色,胞漿中顆粒呈細(xì)小淡紫紅色或藍(lán)紫色。淋巴細(xì)胞胞漿呈淡藍(lán)色。
注意事項(xiàng)
1. 推片:取全血3 微升左右置載玻片上,將推玻片保持與載玻片30 度角,置于血滴正前方,稍往后移與血滴接觸,即可見血液沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面向前滑動,至血液鋪完血膜為止。
2. 涂片時不要太厚也不要太薄,太厚紅細(xì)胞重疊并易皺,太薄時不易找到白細(xì)胞。
3. 用蠟筆在血膜兩頭劃線,平放于染色架上。血膜要干透后才能染色,否則染色時血膜易脫落。
4. 試劑一及二染液不能過少,以防很快蒸發(fā)引起染液沉淀。試劑一不可少于400 微升,試劑二是試劑一的1 倍量。滴加試劑一及二時要輕搖玻片或用洗耳球?qū)?zhǔn)血片吹氣,使染液充分混合。
5. 鏡檢時如果紅細(xì)胞偏藍(lán),請放在蒸餾水中1-3 分鐘,直至紅潤為止。
6. 染色過淡,可復(fù)染。染色過深,可用水沖洗或浸泡,還可用75%乙醇脫色3-5 秒。
儲存:2~8℃,避光,有效期12個月。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
伊維菌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aucubin微管相關(guān)蛋白EB家族3抗體包裝25g
依達(dá)拉奉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Metronidazole真核翻譯起始因子5抗體包裝5g
依法韋侖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Metronidazole遺傳性前列腺癌蛋白2抗體包裝25g
依那普利拉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 8-O-Acetylharpagide磷化絲裂原活化蛋白激1抗體包裝5g
依那普利雙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chrysoobtusin磷化絲裂原活化蛋白激1抗體包裝25ml
依諾肝鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Myristicin磷化絲裂原活化蛋白激1抗體包裝5ml
依諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Kakuol染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1/染色體區(qū)域穩(wěn)定必需蛋白抗體包裝100mg
依帕司他(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Asarinin上皮微管相關(guān)蛋白7抗體包裝1g
依普利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gitogenin堿性鞘磷脂7抗體包裝100g
依替膦二鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isoliquiritigenin表皮生長因子樣重復(fù)折疊1結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝25g
依替米星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isoliquiritigenin長鏈脂肪延長長ELOVL6抗體包裝100g
*度(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ginsenoside Re酪蛋白激受體A6抗體包裝25g
*度(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ginsenoside F4酪蛋白激受體A3抗體包裝5g
*紅霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ginsenoside RK3酪蛋白激受體A7抗體包裝1g
*(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ginsenoside RH4酪蛋白激受體B1抗體包裝5g
腐皮鐮孢Fusarium│solani 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白試劑盒2,3,5,4’-四羥基二乙烯-2-O
: ATCC27562=DSM10143=NBRC15645=JCM3725=BCRC12905=CCRC12905=CECT529=CCUG13448資源名稱: 創(chuàng)傷弧菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品糖皮質(zhì)激受體β試劑盒石吊蘭;Lysionotin
短芽孢桿菌Bacillus│pumilus 質(zhì)量規(guī)格:>900μg//mg,USP,BR糖皮質(zhì)激受體α試劑盒射干苷元;tectorigenin
快速瑞氏染液辛基瓊脂糖凝膠4FF
英文名稱:Octyl Sepharose 4FF
產(chǎn)品規(guī)格:國產(chǎn)
包裝:25毫升/100毫升
產(chǎn)品規(guī)格:進(jìn)分
包裝:25毫升/100毫升
CAS號:68652-09-5
級別:BR
凝膠類型:疏水層析介質(zhì)
粒 徑: 45-165µm
工作PH值:3-13
操作溫度:4-40℃
配基偶聯(lián)量:5µmol octyl/ml 介質(zhì)
Matrix:Highly cross linked agarose 4%
Type of ligand:Octyl:R-O-CH2-CH(OH)-CH2-O-(CH2)7-CH3
Bead form:R igid,spherical,macro porous
Mean particle size:90um diameter
Particle size distribution:45~165um
Degree of substitution:approx 5 umol octy/ml medium
PH stability:working range 3-13 and cleaning range 2-14
Autoclavable:20 min at 121℃
Linear flow rate at 25℃:≥150cm/h at 100kPa(1 bar, 14.5 psi);XK50/60,25cm bed height
Chemical stability:Stable in all commonly used aqueous buffers-1mM HCL;1M NaOH;(40℃,7 days) 30% isopropanol;70% ethanol; 6 M guanidine-hydrochloride;30% acetonitrile
性狀:含20%乙,底部為乳白色膠體。
用途:生化研究。疏水性中等,適合各種蛋白的分離和純化
保存:2~8℃