化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
中文名稱：Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50次
發(fā)貨周期：1～3天
本試劑盒是一種采用Annexin V-FITC與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通過完整的活細(xì)胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。 |
操作步驟：
1、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
b．對于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。
2、用去離子水按 1:3 稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。
4、取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。
6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。
儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存
注意事項(xiàng)：
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
操作規(guī)程：
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000～0000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)elisa試劑盒英文名稱：PCNA ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體包裝5ml
抗胰蛋白酶(AT)elisa試劑盒英文名稱：AT ELISA Kit蛋白激酶A2抗體包裝1g
抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)elisa試劑盒英文名稱：PA-IgG/M/A ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體2抗體包裝5g
抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa試劑盒英文名稱：ACA-IgM ELISA KitASH1蛋白抗體包裝100g
抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)elisa試劑盒英文名稱：ACA-IgG ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基酶樣蛋白2抗體包裝25g
抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)elisa試劑盒英文名稱：ACA-IgA ELISA Kit血管內(nèi)皮遷移蛋白抗體包裝5g
抗心肌抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱：AMA ELISA Kit糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體包裝100g
抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)elisa試劑盒英文名稱：snRNP/Sm ELISA Kit膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體包裝25g
抗線粒體抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱：AMA ELISA Kit血管生成素樣蛋白3抗體包裝500g
抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)elisa試劑盒英文名稱：aZP-IgG ELISA Kit甘油酯激酶線粒體抗體包裝50MG
抗透明帶抗體(aZP)elisa試劑盒英文名稱：aZP ELISA Kit磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體包裝25ml
抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)elisa試劑盒英文名稱：dsDNA ELISA Kit自噬體ATG16L2蛋白抗體包裝1g
抗平滑肌抗體(ASMA)elisa試劑盒英文名稱：ASMA ELISA Kit酸性磷酸酶抗體包裝100g
抗凝血酶受體(ATR)elisa試劑盒英文名稱：ATR ELISA Kit酸性磷酸酶抗體包裝25g
抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)elisa試劑盒英文名稱：AT-Ⅲ ELISA Kit光激酶A相互作用蛋白1抗體包裝25g
粘附相關(guān)激酶抗體B-淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2)Palbociclib hydrochloride是高選擇性的 CDK4/6 抑制劑，IC50 分別為11 nM 和 16 nM。
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒支鏈淀粉
其他膠淀粉；淀粉精
英文名稱：Amylopectin from potato starch
產(chǎn)品規(guī)格：BR，土豆來源
包裝：1克/5克/50克
產(chǎn)品規(guī)格：BR，玉米來源
包裝：25克/100克/500克
CAS號：9037-22-3
級別：BR
比旋光度：165～185°(C=0.2 in 0.85% Sodium Chloride at 25℃)
性狀：至淡黃色粉末。為組成天然淀粉的兩種主要高分子碳水化合物(直鏈淀粉和支鏈淀粉)之一。作為一種葡萄糖的聚合物系由α-14糖苷鍵將葡萄糖單元聯(lián)結(jié)而成的鏈狀物質(zhì)。它的分子通常卷曲成螺旋形。每一轉(zhuǎn)有六個(gè)葡萄糖分子。聚合度，即葡萄糖單位數(shù)目約在100～6 000，形成不同大小的分子，其分子量即為聚合度和葡萄糖單位分子量162的乘積。直鏈淀粉構(gòu)成天然淀粉的顆粒，以其不同于支鏈淀粉的性質(zhì)影響天然淀粉的性質(zhì)及相關(guān)的應(yīng)用。如直鏈淀粉可與醇、脂肪酸結(jié)合成復(fù)合物而沉淀。在堿性溶液中易發(fā)生降解反應(yīng)。又因分子聚縮而有“凝沉"(retrogradation)，即工業(yè)上稱為“回生"、“老化"的傾向。其直鏈可被β-淀粉酶*消化。淀粉與碘反應(yīng)形成藍(lán)色絡(luò)合物。它存在于大多數(shù)源于糧谷類、薯類等農(nóng)作物的天然淀粉中，一般為淀粉的17％～27％
用途：生化研究。
保存：RT
化工儀器網(wǎng)