化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè)：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè)：Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè)：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué)：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型：原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
50次 | FS-P013363 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
使用方法：
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例） 1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。 2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。 3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。 4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 | 二、樣品DNA的制備 8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取， 多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照）， 一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。 可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。 9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒。 | 三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行） 10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。 11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）
|
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
LY-86/MD-1/FITC 熒光標(biāo)記MD-1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Tau protein/FITC 熒光標(biāo)記微管相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADCY1 腺苷環(huán)化1抗體 0.2ml
Rabbit dog IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml
GLRB 甘受體β/GlyR β抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
Tau protein/FITC 熒光標(biāo)記微管相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
HPA(Human Heparanase) ELISA kit 人乙酰肝Multi-class antibodies： 48T
HSD11B2/HSD2 羥基類(lèi)固醇脫氫11β2抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MASP2 甘露聚糖結(jié)合凝集絲肽2抗體 0.1ml
ADAM10(Human A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit 人解整合樣金屬蛋白10 96T
Radical Fringe β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移抗體 0.2ml
CCL26 C-C元件趨化因子26抗體 0.2ml
HSD11B2/HSD2 羥基類(lèi)固醇脫氫11β2抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit MK IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1ml
GSTP1 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移pi基因抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ANKHD1 艾滋病病毒制約錨定蛋白抗體 0.2ml
IRF3 /FITC 熒光標(biāo)記干擾調(diào)節(jié)因子3抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
SCN9A/NAV1.7/FITC 熒光標(biāo)記電壓開(kāi)啟的鈉離子通道SCN9AIgGMulti-class antibodies： 0.2ml
鴨源性成分PCR檢測(cè)試劑盒人八聚體轉(zhuǎn)錄因子2A（OTF2A）elisa檢測(cè)試劑盒
人大腦糖原磷化（PYGB）elisa檢測(cè)試劑盒
人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1（VEGFR1/FLT1）elisa檢測(cè)試劑盒
人叉頭框蛋白O2（FOXO2）elisa檢測(cè)試劑盒
人白三烯E4（LTE4）elisa檢測(cè)試劑盒
人促有絲分裂因子（MF/MPF）elisa檢測(cè)試劑盒
人單氧化A（MAOA）elisa檢測(cè)試劑盒
人叉頭框蛋白P3（FOXP3）elisa檢測(cè)試劑盒
人叉頭框蛋白O1（FOXO1）elisa檢測(cè)試劑盒
人彈性蛋白4（ELA4）elisa檢測(cè)試劑盒
人肝配蛋白A受體1 （EPHA1）elisa檢測(cè)試劑盒
人長(zhǎng)效甲狀腺（LATS）elisa檢測(cè)試劑盒
人垂體腺苷環(huán)化活肽受體 （PACAPR）elisa檢測(cè)試劑盒
人單核趨化蛋白4（MCP-4/CCL13）elisa檢測(cè)試劑盒
人XII B組磷脂A2（PLA2G12B）elisa檢測(cè)試劑盒
化工儀器網(wǎng)