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詳細介紹
培養(yǎng)操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產(chǎn)品屬于：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內(nèi)轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內(nèi)面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細胞，但能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 |
操作步驟：
1、細胞樣品的準備：
a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。
4、取 100μl的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。
6、在反應管中加 400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。
Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜
Jurkat細胞用順鉑誘導凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜
儲存條件：2～8℃，避光保存
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)elisa試劑盒英文名稱：AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g
抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)elisa試劑盒英文名稱：ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關蛋白TGFb信號抗體包裝100g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa試劑盒英文名稱：TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa試劑盒英文名稱：TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉移酶α4Gn-T抗體包裝5g
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)elisa試劑盒英文名稱：TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基酶抗體包裝10ml
抗抗體(AsAb)elisa試劑盒英文名稱：AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙?；笜拥鞍?抗體包裝1g
抗狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)elisa試劑盒英文名稱：ATGA/TGAB ELISA Kit氨基乙二酸半脫氫酶磷酸泛酰巰基乙轉移酶抗體包裝25g
抗狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)elisa試劑盒英文名稱：TPO-Ab ELISA Kit賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體包裝5g
抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)elisa試劑盒英文名稱：EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復域6抗體包裝25g
抗環(huán)胍氨酸肽抗體(Anti-CCP-antibody)elisa試劑盒英文名稱：Anti-CCP-antibody ELISA Kit精氨酸酶2抗體包裝5g
抗紅細胞抗體(RBC)elisa試劑盒英文名稱：RBC ELISA Kit固酮還原酶家族1成員C3抗體包裝1g
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)elisa試劑盒英文名稱：gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激素受體包裝5g
抗核抗體(ANA)elisa試劑盒英文名稱：ANA ELISA Kit褐黑素相關蛋白ART抗體包裝1g
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)elisa試劑盒英文名稱：ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg
抗單核細胞抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱：AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關蛋白抗體包裝5g
磷酸化粘附相關激酶抗體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激酶的 IC5
Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒正磷酸鐵四水物
其他磷酸高鐵四水物；磷酸鐵四水物
英文名稱：Ferric phosphate tetrahydrate
其他英文名稱：Iron(III) phosphate tetrahydrate
產(chǎn)品規(guī)格：CP，98%
包裝：250克
CAS號：31096-47-6
FePO4•4H2O=222.88
級別：CP
含量：≥98.0%
氯化物：≤0.1%
砷：≤0.0005%
重金屬：≤0.01%
硫酸鹽：≤0.05%
氯化物：≤0.002%
其它堿金屬：≤1.0%
砷：≤0.0005%
鐵：≤0.005%
重金屬：≤0.002%
性狀：結晶或粉末。無氣味，不吸濕。溶于水，水溶液近中性
用途：生化研究
保存：RT
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