操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱:Hoechst33258染色試劑盒
英文名稱:Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
細(xì)胞凋亡時產(chǎn)生顯著的變化是染色體固縮,DNA 裂解使細(xì)胞核形態(tài)產(chǎn)發(fā)生變化。本試劑盒提供的熒光染料Hoechst 33258 是一種無毒、水溶性雙苯咪唑類化合物,可作為熒光探針與DNA 分子結(jié)合。
在凋亡細(xì)胞中,細(xì)胞膜對Hoechst 33258 的攝取增高,并且由于染色體高度濃縮,Hoechst 33258 與之結(jié)合增強,染色呈強藍色熒光,而正常細(xì)胞只呈微弱熒光,死細(xì)胞則不被染色,由此可檢測出凋亡。 |
操作方法
1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
2. 用冷Buffer A 洗滌細(xì)胞二次,離心收集106 細(xì)胞于1.5mL 微量離心管中;(貼壁細(xì)胞原位固定染色)
3. 加入1mL 的4%溶液(用戶自備),4℃固定細(xì)胞10min;
4. 離心去固定液,用Buffer A 洗兩遍;離心后留50~100μL Buffer A 重懸細(xì)胞;
5. 取上步驟50~100μL 細(xì)胞懸液涂片,自然晾干;
6. 滴加100μL Hoechst 33258 工作液(備注1),室溫染色10 min,水沖凈晾干;
7. 以紫外光340nm 波長激發(fā),熒光顯微鏡下觀察。
儲存:2-8℃,避光,有效期一年。
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
川射干(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-galactosaminide磷化粘著斑激抗體包裝1g
川烏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Nitrobenzyl alcohol磷化粘著斑激抗體包裝25g
川西獐牙菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4S Green Nucleic Acid Stain 4S Green下頜發(fā)育不良綜合征相關(guān)蛋白FAKD3抗體包裝5g
川芎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5,5-Dimethyl-1,3-cyclohexanedioneFAM134B蛋白抗體包裝25g
川芎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Fluorocytidine磷化范可尼貧血組蛋白A抗體包裝5g
川續(xù)斷皂苷VI(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Methylindole范可尼綜合征相關(guān)蛋白FANCC抗體包裝100g
川續(xù)斷皂苷乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-NitroguaiacolFXYD離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子6抗體包裝25g
穿山(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Bromo-2-naphtholFyn結(jié)合蛋白抗體包裝5g
穿山龍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Dimethylallylamino purine riboside鋅指蛋白FYCO1抗體包裝100g
穿心蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-MethylcoumarinFYTTD1蛋白抗體包裝25g
穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Aminocephalosporanic acidRNA結(jié)合蛋白9抗體包裝5g
船形烏頭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 8-Hydroxyquinaldine巖藻糖轉(zhuǎn)移11抗體包裝1g
垂盆草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 9,10-Dibromoanthracene干擾誘導(dǎo)蛋白15抗體包裝25g
椿皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 9,9-Bis(4-hydroxyphenyl) fluorineP38相互作用蛋白抗體包裝5g
慈溪麥冬皂苷A英文名稱: Acid blue 29鈣粘樣蛋白28抗體包裝1g
鮑曼不動桿菌Acinetobacter│baunannii 質(zhì)量規(guī)格:進分,97%,一腎上腺髓質(zhì)前體試劑盒去氫鉤藤堿;Corynoxeine
: =DSM16930=LMG22726資源名稱: 羽扇豆蒼白桿菌 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測定;一物腎上腺髓質(zhì)試劑盒3-氫化去氫松苓;Dehydrotra
: ATCC9642CBS246.65CMI91855IFO6342NRRL3536資源名稱: 黑曲霉 質(zhì)量規(guī)格:純度≥98%,BR腎上腺能a1A受體試劑盒羥基酪;3,4-Dihydroxyph
Hoechst33258染色試劑盒芴
其他 9H-芴;二并五環(huán);二亞基;2,2ˊ-亞甲基聯(lián);鄰亞聯(lián)基;二次基;茀;甲基聯(lián)
英文名稱: Fluorene
其他英文名稱: Diphenylenemethane;2,2'-Methylenebiphenyl;2,3-Benzindene;o-Biphenylenemethane;alpha-Diphenylenemethane-9H-fluorene
產(chǎn)品規(guī)格: BR,99%
包 裝: 25克/100克/500克
CAS號:86-73-7
C13H10=166.22
級別:BR
含量:≥99.0%
熔點:111~114℃
性狀:葉狀或小片狀結(jié)晶或粉末。不純時有熒光。在高真空中易升華。易溶于冰乙,溶于二硫化碳、熱乙、、稀和稀堿,不溶于水。相對密度 1.202。沸點 298℃
用途:生化研究。染料。殺蟲劑。除草劑。樹脂。
保存:RT,保質(zhì)期5年