商品介紹:
細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生顯著的變化是染色體固縮,DNA 裂解使細(xì)胞核形態(tài)產(chǎn)發(fā)生變化。熒光染料Hoechst33258 是一種無(wú)毒、水溶性雙苯咪唑類化合物,可作為熒光探針與DNA 分子結(jié)合。 在凋亡細(xì)胞中,細(xì)胞膜對(duì)Hoechst 33258 的攝取增高,并且由于染色體高度濃縮,Hoechst 33258 與之結(jié)合增強(qiáng),染色呈強(qiáng)藍(lán)色熒光,而正常細(xì)胞只呈微弱熒光,死細(xì)胞則不被染色,由此可檢測(cè)出凋亡。
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操作方法(以下操作針對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行)
1. 培養(yǎng)細(xì)胞并爬片;
2. 用冷PBS 洗滌細(xì)胞二次(貼壁細(xì)胞原位固定染色)
3. 加入500μL 的4%溶液(用戶自備),4℃固定細(xì)胞10-30min;
4. 洗去固定液,用PBS 洗兩遍;
5. 滴加100μL Hoechst 33258 染色液,室溫染色10 min,水沖凈晾干;
6. 滴加一滴防淬滅封片液覆蓋樣本;
7. 以紫外光340nm 波長(zhǎng)激發(fā),發(fā)射波長(zhǎng)為460nm,可以在熒光顯微鏡下觀察。
儲(chǔ)存:4℃,避光,有效期6個(gè)月。
產(chǎn)品屬于:
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
次野鳶尾黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acid blue 40FA20A抗體包裝500mg
甘草查爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acid Red 6B成纖維生長(zhǎng)因子18抗體包裝1g
槐苷英文名稱: Aflatoxin B1 from Aspergillus flavus叉頭蛋白O1抗體包裝25g
梨苷英文名稱: Aflatoxin B2纖維母生長(zhǎng)因子6抗體包裝5g
梨果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aflatoxin G1免疫球蛋白A Fc段受體1抗體包裝25g
梨葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aflatoxin G2脂肪延長(zhǎng)抗體包裝5g
芒柄花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Alizarin yellow R , sodium salt巖藻糖轉(zhuǎn)移2抗體包裝100mg
芒柄花;芒柄花黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ALL, D-Allose雞白痢、雞傷寒抗體包裝500mg
玫果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: alpha-D-Glucose-1-phosphate, disodium salt, hydrate范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體包裝250mg
囊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: alpha-Methylcinnamic acid卵泡抑抗體包裝100mg
桐堿英文名稱: Aluminum acetate, basicFas活化的絲/蘇激抗體包裝25g
五加(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum fluoride trihydrate脆性組三聯(lián)體抗體包裝5g
五加苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum oxide, active纖維母表面蛋白抗體包裝25g
五加皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum oxide, active前列腺E受體4相關(guān)蛋白抗體包裝5g
楤木(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum potassium sulfate docecahydrateFLAG Tag標(biāo)簽抗體(N端)包裝5g
樟疫霉Phytophthora│cinnamomi Rands 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)腎上腺試劑盒去烏藥堿;Higenamine
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品腎上腺皮質(zhì)抗體試劑盒芹菜苷;Apiin
豬丹毒絲菌Erysipelothrix│rhuriopathiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR蛋白試劑盒1-羥基-2,3,4,7-四氧基山山
oechst 33258染色液(即用型)戊烷磺鈉
其他 1-戊烷磺鈉;戊烷-1-磺鈉鹽;正戊烷磺鈉;戊基磺鈉
英文名稱: Sodium 1-pentanesulfonate
其他英文名稱: Sodium pentanesulfonate;1-Pentanesulfonic acid sodium salt;IPC-ALKS-5
產(chǎn)品規(guī)格: 超純,99%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):22767-49-3
C5H11O3SNa=174.19
級(jí)別:Ultra pure grade
含量:≥98.0%
水分:≤2.0%
性狀:結(jié)晶粉末,熔點(diǎn)≥300℃。溶于水
用途:生化研究。表面活性劑,用于研究多重乳狀液。離子對(duì)色譜用
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