培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
本試劑盒可應(yīng)用于細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測(cè)。大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),其中線粒體跨膜電位(△?)的破壞,被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中最早發(fā)生的事件之一,它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。 本試劑盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一種陽(yáng)離子脂質(zhì)熒光染料作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑。JC-100 可以選擇性地進(jìn)入線粒體,且由于膜電位的增加,其顏色會(huì)發(fā)生從綠色到橙色的可逆性改變。這種特性是由于JC-100 聚合物的可逆結(jié)構(gòu),在膜極化條件下,它的發(fā)射光由520nm(JC-100 單體發(fā)射光)轉(zhuǎn)移到570nm (J-聚合體發(fā)射光)。當(dāng)在490nm 處激發(fā)時(shí),JC-100 發(fā)生從綠色到橙綠色的可逆改變。這兩種顏色都可以被流式細(xì)胞儀上裝好的一般濾光器檢測(cè)到,因此綠色發(fā)射光可以通過(guò)熒光通道1(FL1)進(jìn)行分析,橙綠色發(fā)射光可以通過(guò)熒光通道2(FL2)進(jìn)行分析。它除了有潛力用于流式細(xì)胞術(shù),也可以用于熒光成像分析。 |
注意事項(xiàng)
1. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. JC-10 避光保存及使用。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)至匯合度80-90%,收集細(xì)胞量在1×106/Test。
4. 對(duì)PH 變化過(guò)于敏感的細(xì)胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌,或延長(zhǎng)觀測(cè)時(shí)間。
5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化受到多種因素的影響,因誘導(dǎo)劑、細(xì)胞株類型,作用時(shí)間的不同而熒光強(qiáng)度比例都有不同,因此沒(méi)有通用標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)償設(shè)門(mén)指南,因此每個(gè)試驗(yàn)需設(shè)陰性及陽(yáng)性對(duì)照組進(jìn)行熒光補(bǔ)償及設(shè)門(mén)。
6. 組織需先制備單細(xì)胞懸液或提取純化線粒體后方可進(jìn)行檢測(cè),可選用我司細(xì)胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
α2抗纖溶酶(α2-AP)elisa試劑盒英文名稱:α2-AP ELISA Kitβ-乳球蛋白抗體包裝5g
α1微球蛋白(α1-MG)elisa試劑盒英文名稱:α1-MG ELISA Kit緩激肽B2受體抗體包裝1g
α1性糖蛋白(α1-AGP)elisa試劑盒英文名稱:α1-AGP ELISA Kit丁酰堿酯酶抗體(N端)包裝25g
α1抗胰白酶(AACT)elisa試劑盒英文名稱:AACT ELISA Kit丁酰堿酯酶抗體(C端)包裝5g
α1干擾素(IFN-α1)elisa試劑盒英文名稱:IFN-α1 ELISA KitBLAME抗體包裝10MG
Wnt-3a蛋白(WNT3A)elisa試劑盒英文名稱:WNT3A ELISA Kit巴曲霉素單克隆抗體包裝25g
Wnt-10b蛋白(WNT10B)elisa試劑盒英文名稱:WNT10B ELISA Kit蛇巴曲酶抗體包裝5g
V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)elisa試劑盒英文名稱:HRAS ELISA Kit溴脫氧尿苷抗體包裝1g
T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)elisa試劑盒英文名稱:LAT ELISA Kit腫瘤/抗原2.2抗體包裝25g
T細(xì)胞表面糖蛋白CD3 epsilon鏈(CD3E/T3E)elisa試劑盒英文名稱:CD3E/T3E ELISA Kit腫瘤/抗原2.3抗體包裝5g
T細(xì)胞白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)elisa試劑盒英文名稱:Tlx1/Hox11/Tlx-1 ELISA Kit腫瘤/抗原2.4抗體包裝1g
Toll樣受體9(TLR-9/CD289)elisa試劑盒英文名稱:TLR-9/CD289 ELISA Kit腦鈉素/利鈉肽抗體包裝5g
Toll樣受體7(TLR7)elisa試劑盒英文名稱:TLR7 ELISA KitB Raf抗體包裝1g
Toll樣受體5(TLR-5)elisa試劑盒英文名稱:TLR-5 ELISA Kit癌易感基因1抗體包裝5g
TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)elisa試劑盒英文名稱:TIEG1 ELISA Kit癌易感基因2抗體包裝25g
磷化腺苷單磷活化蛋白激酶α1抗體基質(zhì)衍生因子2樣蛋白1(SDF2L1)MHY1485 是一種有效的滲透性 mTOR 激活劑,靶向 mTOR 的 ATP 結(jié)構(gòu)域。MHY 1485 通過(guò)抑制自噬體和溶酶體之間的
細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)硬脂鋅
其他 硬酯鋅;十八鋅;脂蠟鋅;十八鋅鹽;硬脂鋅鹽
英文名稱: Stearic acid zinc salt
其他英文名稱: Zinc stearate;Octadecanoic acid zinc salt
產(chǎn)品規(guī)格: CP,13.5-15.5%
包裝:500克
CAS號(hào):557-05-1
C36H70O4Zn=632.33
級(jí)別:CP
含量(以ZnO計(jì)):13.5~15.5%
度(以H+計(jì)):≤1.74mmol/100g
水溶物:≤0.5%
干燥失重:≤1.0%
氯化物:≤0.2%
硫鹽:≤0.2%
性狀:細(xì)軟粉末。微有刺激性氣味。有滑膩感。中性反應(yīng)。 能被稀所分解。溶于、熱乙和松節(jié)油等有機(jī)溶劑,不溶于水、乙。相對(duì)密度 1.095。熔點(diǎn) 約120℃。小致死量(大鼠,腹腔)250mg/kg。商品常為硬脂鋅、棕櫚鋅和適量氧化鋅的混合物。
用途:生化研究。抗泡沫劑。光和熱穩(wěn)定劑。油漆平光劑和研磨劑。橡膠干燥潤(rùn)滑劑和隔離劑。塑料脫模劑?;炷?、褐塊石棉、紙、織物的防水劑
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