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Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒

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更新時間:2022-04-19 16:45:49瀏覽次數(shù):199

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次
貨號 FS-X9558 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒正在出售的產(chǎn)品:轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)elisa試劑盒英文名稱:TGF-β2 ELISA Kit載脂蛋白E4抗體包裝25g

轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)elisa試劑盒英文名稱:TGFβ2 ELISA Kit自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體包裝10mg

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒英文名稱:TGF-β1 ELIS

詳細介紹

產(chǎn)品屬于:

中文名稱

英文名稱

產(chǎn)品規(guī)格

發(fā)貨周期

Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

50次

1~3天

商品介紹:

本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。

細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面,這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細胞膜外,使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂,正常主要存在于細胞膜的內(nèi)面,在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性,對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的,而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料,可進入死細胞內(nèi)與DNA結(jié)合,能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募毎M行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性,但其發(fā)射波譜較PI窄,對其他檢測通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI的最佳替代品,因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色,以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。

操作步驟:

1、細胞樣品的準(zhǔn)備:

a.對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。

b.對于懸浮細胞:1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。

2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去離子水)。

3、用250μl Binding Buffer重新懸浮細胞,調(diào)節(jié)其濃度為1×106/ml。

4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。

5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。

6、在反應(yīng)管中加400μl PBS,流式細胞儀(FACS)分析。

Jurkat細胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜

儲存條件:2~8℃,避光保存
培養(yǎng)操作步驟:

1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

抗促狀腺素受體抗體(TRAb)elisa試劑盒英文名稱:TRAb ELISA Kit腺相關(guān)病5 VP1抗體包裝5MG

α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)elisa試劑盒英文名稱:α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit脂肪脫氫酶抗體包裝100g

Smith抗體(Sm)elisa試劑盒英文名稱:Sm ELISA Kit抗利尿激素1A抗體包裝25g

卷曲螺旋域結(jié)合蛋白80(CCDC80)elisa試劑盒英文名稱:CCDC80 ELISA Kit抗利尿激素受體1B抗體包裝5g

巨噬細胞移動因子(MIF)elisa試劑盒英文名稱:MIF ELISA Kit二磷酸腺苷核糖基化因子鳥嘌呤核苷酸交換因子2抗體包裝1g

巨噬細胞移動抑制因子(MIF)elisa試劑盒英文名稱:MIF ELISA Kitα增強子結(jié)合蛋白1抗體包裝5g

巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa試劑盒英文名稱:MIP-5 ELISA Kit脊髓小腦共濟失調(diào)10抗體包裝250mg

巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa試劑盒英文名稱:MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit蛋白激酶A錨定蛋白7抗體包裝1g

巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)elisa試劑盒英文名稱:MIP-3α/CCL20 ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體12抗體包裝5g

巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa試劑盒英文名稱:MIP-2 ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體9抗體包裝25g

巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)elisa試劑盒英文名稱:MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白4抗體包裝5g

巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)elisa試劑盒英文名稱:MIP-1β/CCL4 ELISA Kit肌動蛋白結(jié)合蛋白LIM3抗體包裝100g

巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP1α)elisa試劑盒英文名稱:MIP1α ELISA Kit高爾基復(fù)合體相關(guān)蛋白1抗體包裝25g

巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa試劑盒英文名稱:MDC/CCL22 ELISA Kit乙酰羧化酶1ACCα抗體包裝100mg

巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)elisa試劑盒英文名稱:M-CSF ELISA Kit腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白1、2、3、4抗體包裝1g

磷酸化蛋白激酶B抗體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)L-685458是一種有效的淀粉樣β蛋白前體γ分泌酶抑制劑, IC50為17 nM,比作用于其他天冬氨酰蛋白酶選擇性高50-100倍。
Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒正磷酸鐵二水物

其他磷酸高鐵二水物;磷酸鐵二水物;磷酸鐵(Ⅲ)二水物

英文名稱:Ferric phosphate dihydrate

其他英文名稱:Iron(III) phosphate dihydrate

產(chǎn)品規(guī)格:電子級,98%

包裝:25克

CAS號:13463-10-0

FePO4•2H2O=186.85

級別:電子級

總含量:≥98.0%

總鐵(Fe):≥26.0%

灼燒失重(800℃,1h):≤32.5%

重金屬:≤20mg/kg

性狀:微透紅色粉末,不溶于水和醋酸,溶于無機酸

用途:生化研究。用作顏料、陶瓷金屬釉色釉料的重要原料,作為鐵鹽強化劑,多用于蛋制品、米制品和糊狀制品

保存:RT

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 


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