Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒公司*的商品：微小染色體維持缺陷蛋白7抗體龍血竭（標(biāo)準(zhǔn)品） 2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole
E3泛連接MUL1抗體龍血A（標(biāo)準(zhǔn)品） 2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole
纖微絲相關(guān)糖蛋白2抗體龍芽楤木（標(biāo)準(zhǔn)品） 2-(

產(chǎn)品屬于：

商品介紹：

在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標(biāo)志事件。

檢測原理：

在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。

Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-PE。

Annexin V-PE 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細(xì)胞。常用的染料是7-AAD。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，7-AAD 能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。

7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-PE和7-AAD 結(jié)合顯色，而7-AAD 則被排除在活細(xì)胞(PE陰性)和早期凋亡細(xì)胞(PE陽性)之外。在沒有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被PE和7-AAD 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性。

儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。

Annexin V-PE染色液避免反復(fù)凍融，凍融2次以上可能會(huì)失效。長期保存分裝后-20℃保存。

有效期：一年。
培養(yǎng)操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

鹽洛美利英文名稱： Lomefloxacin HCl結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體包裝10MG

鹽馬尼地平英文名稱： Lomefloxacin HClⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體包裝100mg

鹽美西律（慢心率）英文名稱： Loteprednol EtabonateCSMD2蛋白抗體包裝500mg

鹽尼非卡蘭英文名稱： Loteprednol EtabonateCSMD3蛋白抗體包裝1g

鹽尼卡地平英文名稱： Lovastatin,Monacolin K鈣調(diào)神經(jīng)磷CSTP1抗體包裝250mg

鹽普拉格雷英文名稱： Lovastatin,Monacolin KCTAGE6蛋白抗體包裝1g

鹽普魯卡因英文名稱： Lubiprostone皮膚T淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體包裝1g

鹽曲美他英文名稱： Lypressin Acetate膜蛋白CLDND2抗體包裝25g

鹽索他洛爾英文名稱： Matrixyl Acetate含半胱和組豐富域蛋白1抗體包裝5g

鹽特拉唑英文名稱： Meclofenoxate HCl豬圓環(huán)?、蛐鸵職さ鞍装b5g

鹽替羅非班英文名稱： Meclofenoxate HCl抗菌肽CAMP抗體包裝1g

鹽維拉帕米英文名稱： Megestrol Acetate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體包裝5g

依那普利拉英文名稱： Megestrol Acetate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體包裝1g

依普利酮英文名稱： Melanotan ⅡAcetate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體包裝5g

*貝特英文名稱： Meloxicam卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體包裝1g

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR循環(huán)免疫復(fù)合物試劑盒鹽藥根堿;Jatrorrhizine

黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格：>98%血影蛋白試劑盒銀杏內(nèi)酯C;Ginkgolide C

細(xì)腳擬青霉Paecilomyces tenuipes 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血血小板衍生生長因子可溶性受體α試劑盒葉;Folic acid
Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒氧化鐵

其他 三氧化二鐵；紅色氧化鐵；氧化高鐵；205鐵紅；磁性氧化鐵紅；燒褐鐵礦；鐵丹；紅粉；威尼斯紅

英文名稱： Iron(III)oxide

其他英文名稱： Ferric oxide；Iron oxide red；Red iron trioxide

產(chǎn)品規(guī)格： 4N

包裝：10克

產(chǎn)品規(guī)格： AR，99%

包裝：500克

CAS號(hào)：1309-37-1

Fe2O3=159.69

級(jí)別：4N

含量：≥99.99%

級(jí)別：AR

含量：≥99.0%

鹽不溶物：≤0.02%

重金屬(以Cu計(jì))：≤0.01%

水溶物：≤0.1%

硫化銨不沉淀物：≤0.2%

總氮量：≤0.005%

硫鹽：≤0.08%

性狀：紫棕色粉末。溶于,不溶于水。相對(duì)密度5.12～5.24。熔點(diǎn)1565℃。小致死量(狗,皮下)30mG/kG。有刺激性

用途：生化研究。分析試劑。催化劑。拋光劑。顏料配制。玻璃濾片(綠色)著色。鐵氧體

保存：RT

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。