Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒公司*的商品：維生A抗體科羅索 COROSOLIC ACID(P)Human, Mouse, Rat
蛋白聚糖Versican抗體科羅索 COROSOLIC ACID(P)Human, Mouse, Rat
VWCE抗體可替寧 COTININE(RG)Human, Mouse, Rat
視神經(jīng)視網(wǎng)膜相關(guān)蛋白VAX1抗體2-鄰香豆 COU

培養(yǎng)操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

產(chǎn)品屬于：

 

商品介紹：

在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標(biāo)志事件。

檢測原理：

在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。

Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-APC。

Annexin V-APC 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細(xì)胞。常用的染料是7-AAD。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，7-AAD 能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。

7-AAD/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-APC和7-AAD 結(jié)合顯色，而7-AAD 則被排除在活細(xì)胞(APC陰性)和早期凋亡細(xì)胞(APC陽性)之外。在沒有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被APC和7-AAD 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性。

儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。

Annexin V-APC染色液避免反復(fù)凍融，凍融2次以上可能會(huì)失效。長期保存分裝后-20℃保存。

有效期：一年。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

格列齊特英文名稱： Mizolastine先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體包裝100ml

磺丁脲英文名稱： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關(guān)粘附分子16抗體包裝25ml

米格列英文名稱： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關(guān)粘附分子21抗體包裝100g

米格列奈鈣英文名稱： Nelarabine貓眼綜合征染色體候選基因5抗體包裝25g

瑞格列奈英文名稱： Nesiritide AcetateCUE結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝5g

特力利汀;氫替格列汀英文名稱： Netilmicin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體包裝1g

鹽二雙胍英文名稱： Netilmicin Sulfate補(bǔ)體片段C3c抗體包裝5g

(+)-（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Nystatin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白68抗體(皮膚T淋巴淋巴瘤相關(guān)抗原)包裝5MG

(+)2-基?。?biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Olanzapine卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體包裝1g

(+/-)-兒茶精（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Olanzapine卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體包裝5g

(S)-(+)-（普瑞巴林雜質(zhì)）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ondansetron HCl卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體(狀狀腺癌編碼蛋白)包裝25g

1,4-對醌（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ondansetron HCl周期依賴激2相關(guān)蛋白2抗體包裝5g

1-基海因鹽鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ornidazole1號染色體開放閱讀框201抗體包裝100mg

1-基海因（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ornidazole卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體包裝25g

10％A晶型咪唑英文名稱： Oxaliplatin卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80抗體包裝5g

酚節(jié)桿菌Arthrobacter│chlorophenolicus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)血小板衍生生長因子BB試劑盒野百合堿;Monocrotaline

副豬嗜血桿菌Haemophilus│parasuis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血小板衍生生長因子AA試劑盒鹽育亨賓;Yohimbine hydr

: AS4.360資源名稱: 燼灰鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,培養(yǎng)級血小板型磷果糖激試劑盒巖白菜;Bengenin
Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒氧化釤

其他 三氧化二釤

英文名稱： Samarium oxide

其他英文名稱： Samarium(III) oxide

產(chǎn)品規(guī)格： 3N

包　　裝： 10克/25克/100克/500克

產(chǎn)品規(guī)格： SP，99.5%

包　　裝： 1克

CAS號：12060-58-1

Sm2O3=348.72

級別：3N

含量：≥99.9%

級別：SP

含量：≥99.5%

稀土雜質(zhì)：≤0.01%

非稀土雜質(zhì)：≤0.002%

性狀：黃粉末。露置空氣中吸收水分和二氧化碳。溶于,不溶于水。相對密度 8.347。熔點(diǎn) 2300±50℃。半數(shù)致死量(小鼠,腹腔)365mG/kG

用途：生化研究。發(fā)射光譜分析標(biāo)準(zhǔn)。乙脫氫反應(yīng)催化劑。中子吸收劑,核動(dòng)力反應(yīng)中用作控制棒。磁性材料、記憶元件的原料

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