詳細介紹
商品介紹:
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE對細胞進行示蹤及增殖檢測的試劑盒,由CFDA,SE粉末、溶劑及相關(guān)細胞染色緩沖液組成,該試劑盒主要工作原理為:CFDA, SE具有細胞膜滲透性,本身不具有熒光發(fā)光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后,可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE),后者可發(fā)強烈的綠色熒光,不能穿透細胞膜,能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細胞蛋白質(zhì)上,同時過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養(yǎng)基內(nèi),被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng)CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定,穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)月,因此非常適用于細胞群落分析。 |
CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一,優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26,并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中,CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半,通過流式細胞儀(FL1通道)根據(jù)熒光強度的不同,可檢測出未分裂細胞,分裂一次(1/2的熒光強度),二次(1/4的熒光強度),三次(1/8的熒光強度),以及更多分裂次數(shù)的細胞。CFSA,SE可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細胞的增殖檢測,也可用于成纖維細胞,自然殺傷細胞,造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。
CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光,Ex=494nm,Em=521nm,除了流式細胞儀檢測細胞增殖外,還可用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目,或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。
本品為CFDA,SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒,包含配制CFDA,SE儲存液所需的溶劑和細胞標記用的染色緩沖液,簡化了實驗前期準備工作。另,CFDA,SE標記細胞一般15min即可完成,對于不同細胞,需要自行摸索最佳標記時間。按照每個樣本的標記體積為2ml計算。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit | 500T | 1~3天 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
解整合金屬蛋白9(ADAM9)elisa試劑盒英文名稱:ADAM9 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白62抗體包裝250mg
解整合金屬蛋白8(ADAM8)elisa試劑盒英文名稱:ADAM8 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白64抗體包裝25g
結(jié)合珠蛋白(Hpt)elisa試劑盒英文名稱:Hpt ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白72抗體包裝5g
接觸蛋白1(CNTN1)elisa試劑盒英文名稱:CNTN1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白73抗體包裝100g
窖蛋白(CAV1)elisa試劑盒英文名稱:CAV1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白74B抗體包裝25g
角質(zhì)轉(zhuǎn)谷酰胺(TGM1)elisa試劑盒英文名稱:TGM1 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框25抗體包裝5g
角蛋白9(KRT9)elisa試劑盒英文名稱:KRT9 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框42抗體包裝100g
角蛋白18(KRT18)elisa試劑盒英文名稱:KRT18 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框44抗體包裝25g
膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)elisa試劑盒英文名稱:GDNF ELISA Kit19號染色體開放閱讀框48抗體包裝500g
腱蛋白樣蛋白2(CHRDL2)elisa試劑盒英文名稱:CHRDL2 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框50抗體包裝100g
堿性鞘磷脂磷二酯(Alk-Smase)elisa試劑盒英文名稱:Alk-Smase ELISA Kit19號染色體開放閱讀框51抗體包裝25g
堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)elisa試劑盒英文名稱:FGF2 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框52抗體包裝5g
剪接因子3B亞基3(SF3B3)elisa試劑盒英文名稱:SF3B3 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框55抗體包裝1g
間隙連接蛋白43(CX43)elisa試劑盒英文名稱:CX43 ELISA Kit19號染色體開放閱讀框56抗體包裝5g
間皮(MSLN)elisa試劑盒英文名稱:MSLN ELISA Kit19號染色體開放閱讀框57抗體包裝25g
: T63資源名稱: 傷寒沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品脂肪結(jié)合蛋白4試劑盒羊蹄;Nepodin
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:> 99%,EP脂肪甘油三酯脂試劑盒異肥皂草苷;Isosaponarin
新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品脂肪分化相關(guān)蛋白試劑盒異七葉皂苷Ib;Isoescin Ib
細胞增殖與示蹤檢測試劑盒乙銨
其他 乙铔;醋銨;乙銨鹽;醋
英文名稱: Ammonium acetate
其他英文名稱: Acetic acid ammonium salt
產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%
包裝:500克
CAS號:631-61-8
C2H7NO2=77.08
級別:AR
含量:≥98.0%
pH(50g/L,25℃):6.5~7.5
澄清度試驗:合格
鈣:≤0.001%
還原高錳鉀物質(zhì):≤0.01%
硫鹽:≤0.002%
磷鹽:≤0.0005%
氯化物:≤0.0005%
鎂:≤0.0004%
水不溶物:≤0.005%
鐵:≤0.0005%
重金屬:≤0.0005%
硝鹽:≤0.001%
灼燒殘渣:≤0.005%
性狀:無色結(jié)晶。稍有乙氣味。極易潮解。易溶于水和乙,微溶于酮。水溶液呈弱性,0.5mol/L水溶液的pH為7.0。相對密度(d204)1.17。熔點114℃。致死量(小鼠,靜脈)1.8mG(NH+4)/20G。有刺激性。
用途:生化研究。用以配制緩沖液,測定鋁和鐵。從其他硫鹽分離硫鉛
保存:RT