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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鵝源性核酸檢測試劑盒48T0.2PCR管
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-02R6398
產(chǎn)品規(guī)格：48T 0.2PCR管
產(chǎn)品分類：PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
HABP ELISA Kit 大鼠透明質(zhì)結(jié)合蛋白Multi-class antibodies： 48T
TOPO II Alpha (Ser1106) 磷化DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh GLMN/FK506 binding protein associated protein FK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體(他克莫司相關(guān)蛋白) 0.2ml
AMA(Mouse Monocyte antibody) ELISA KIT 小鼠抗單核細(xì)胞抗體 96T
Ninjurin 2 神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體 0.2ml
ASB13 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族13抗體 0.2ml
TOPO II Alpha (Ser1106) 磷化DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
SP-C(Human Pulmonary surfatcant-associated protein C) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CMulti-class antibodies： 48T
HPV18 E6 人類狀瘤病毒18 E6抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCG10 RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體 0.2ml
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合連接激1 96T
RHCG RH血型C糖蛋白抗體 0.2ml
Collagen I Ⅰ型膠原/1型膠原a1抗體 0.1ml
HPV18 E6 人類狀瘤病毒18 E6抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit Goat IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.3ml
GPR126 G蛋白偶聯(lián)受體126抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADORA1 腺苷A1A受體抗體 0.2ml
LKB1/FITC 熒光標(biāo)記一種抑癌基因IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit dog IgG 兔抗狗IgG 1mg
Phospho-Syk (Tyr525/526) /FITC 熒光標(biāo)記磷化非受體型酪蛋白激抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
鵝源性核酸檢測試劑盒48T0.2PCR管紫蘇子Zi Suzi
大腹皮Pericarpium Arecae
使君子（使君子仁）Idolkimi
桃仁（山桃）Peach?（Prunus）
阿米卡星Amikacin
高山紅景天Rhodiola sachalinensis
鹿茸（馬鹿）Pilose antler?（red deer）
豨薟草（豨薟）Herba Siegesbeckiae?（Herba Siegesbeckiae）
桿菌肽Bacitracin
白頭翁Pulsatilla chinensis
牛角粉Water buffalo horn?powder
人參莖葉Ginseng stem leaf
紅霉Erythromycin
環(huán)己烷Cyclohexane
乙醇Ethanol
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
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