化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1303 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 直腸組織 | 種屬來源 | 人 |
詳細(xì)介紹
人直腸成纖維細(xì)胞
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人直腸成纖維細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1303 |
組織來源 | 直腸組織 | 種屬來源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維樣細(xì)胞 |
培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系
傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介：直腸是自肛緣起向上15cm的一段大腸。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。
直腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。
成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，腫瘤間質(zhì)對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。成纖維細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成成分,與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。腫瘤間質(zhì)中成纖維細(xì)胞活化為癌相關(guān)成纖維細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞-成纖維細(xì)胞相互作用過程中的一個(gè)重要過程,是成纖維細(xì)胞發(fā)揮腫瘤調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵。同時(shí)成纖維細(xì)胞的變化也與許多其他直腸疾病密切相關(guān)。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞 | 豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化 |
組蛋白H3（核內(nèi)參）抗體 | 錯(cuò)配修復(fù)蛋白3抗體 |
人原代髓核細(xì)胞永生化 | 癌/睪丸抗原抗體86抗體 |
人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化 | FXYD3蛋白抗體 |
人胰腺腫瘤成纖維細(xì)胞永生化 | 肌營養(yǎng)蛋白δ/δ-sarcoglycan抗體 |
人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化 | 腺苷受體蛋白抗體 |
大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化 | SEDL蛋白抗體 |
小鼠肺成纖維細(xì)胞永生化 | 干擾調(diào)節(jié)因子5抗體 |
小鼠胰腺星狀細(xì)胞永生化 | 膜孕激受體α/mPRα抗體 |
鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化 | 人絨毛膜促性腺激α亞基/hCG α 抗體 |
湖羊瘤胃上皮細(xì)胞永生化 | 內(nèi)收蛋白抗體 |
豬肝星狀細(xì)胞永生化 | 人直腸成纖維細(xì)胞線粒體內(nèi)鈣結(jié)合天冬氨/谷氨載體蛋白抗體 |
豬鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化 | 淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒Z蛋白抗體 |
小鼠腎小球系膜細(xì)胞永生化 | 軸絲動(dòng)力蛋白重鏈9抗體 |
人卵巢癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化 | 2號(hào)染色體開放閱讀框71抗體 |
化工儀器網(wǎng)