淋巴細(xì)胞活化基因-3（CD223）抗體

抗體制備過程：

1.材料與試劑

 a．提取的動(dòng)物 Ig

 b．弗氏佐劑和弗氏佐劑

 d．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔

 e．其它材料及試劑

2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。

3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。

4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試，查看免疫效果。

5、如果免疫成功，殺死實(shí)驗(yàn)活體，采集全部血清。

6、純化出抗體。

7、鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）
詳細(xì)介紹：

英文名稱：LAG3

英文別名:Lymphocyteactivationgene3protein;Lymphocyteactivationgene3;CD223;FDCprotein;LAG3;LAG-3;LAG3_HUMAN.

交叉反應(yīng):Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit

標(biāo)記:Unconjugated

抗體來源:Rabbit

抗體類型:Polyclonal

免疫原:KLHconjugatedsyntheticpeptidederivedfromhumanLAG-3

純化方法:affinitypurifiedbyProteinA

亞型:IgG

性狀:Liquid

濃度:1mg/ml

儲(chǔ)存液:0.01MTBS(pH7.4)with1%BSA,0.03%Proclin300and50%Glycerol.

保存條件:Shippedat4℃.Storeat-20°Cforoneyear.Avoidrepeatedfreeze/thawcycles. 
公司產(chǎn)品僅用于科研  
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操作步驟:

1.脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡 15 分鐘,重復(fù)三次。去除多余的液體后,依次置于無水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡 5 分鐘,蒸餾水(或自來水)沖洗 5 分鐘。用 PBS 緩沖液(試劑 1,將干粉溶解于 1L 去離子水中)沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。

2.抗原修復(fù)。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯(或修復(fù)盒)中的耐高溫塑料切片架上,加適量修復(fù)液 1× 檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(試劑 2,將 100×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液加去離子水稀釋成 1×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液),液面要浸過切片組織一定高度,將修復(fù)盒置于沸水中煮沸修復(fù) 15 分鐘后取出玻片,自然涼至室溫。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。

注意:抗原修復(fù)時(shí),修復(fù)液務(wù)必保證切片始終浸泡在液體內(nèi),一般情況:修復(fù)液的量約為 800mL/1 架。
3.阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。用吸水紙擦干玻片,免疫組化筆在組織周圍畫圈,滴加 50μL 內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑(試劑 3)到切片組織上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育 30 分鐘,用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。

4.血清封閉。用吸水紙擦干玻片,滴加 50μL 正常山羊血清工作液(試劑 5),37℃封閉 20 分鐘,以減少非

特異性染色。

5.一抗孵育。用抗體稀釋液(試劑 4)將一抗原液稀釋成工作液,用吸水紙擦干玻片組織周圍的液體,滴加適量抗體工作液,置于濕盒 4℃孵育過夜或 37℃孵育 1h-2h。

6.復(fù)溫。4℃過夜后從冰箱拿出樣本,在室溫下孵育 15min 復(fù)溫(抗體孵育為 4℃過夜選用此步驟,如室溫孵育直接進(jìn)入下一步清洗)。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。

7.二抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 標(biāo)記的羊抗兔 IgG(試劑 6),37℃孵育 20  分鐘,用 PBS

緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。

8.三抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素孵育(試劑 7),37℃孵育 20  分鐘,用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,重復(fù)三次。

9.顯色。甩去 PBS 緩沖液,吸水紙擦干切片; 每張切片滴加新鮮配制的 DAB 工作液 50μL(試劑 8:試劑 9:試劑 1=1:1:18  比例配置),孵育 3-5min,光學(xué)顯微鏡下觀察染色結(jié)果,切勿顯色過深;顯色后用自來水沖洗切片終止顯色。

10.復(fù)染。滴加適量蘇木素染液(試劑 10)復(fù)染,孵育 1-5 分鐘,自來水沖洗 5 分鐘,滴加鹽酸酒精分化

液分化30秒,自來水沖洗。

11.脫水封片。將玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇,各浸泡5分鐘, 再將玻片放入二甲苯中浸泡 15 分鐘,重復(fù)三次。玻片取出來稍晾干,用中性樹膠封片。

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