轉(zhuǎn)基因品系水稻LLRice62染料法qPCR試劑盒

?
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
D-氨酸Cyclin D2 (D52F9) Rabbit mAb叔丁基溴

D-氨酸Cyclin D2 (D52F9) Rabbit mAb6-甲基-氨基-2-吡啶

β-氨酸E2F-1 Antibody1-甲基--吡唑

β-氨酸(標準品)Rig-I (D14G6) Rabbit mAb9-[羥基-(羥甲基)-丁基]-鳥嘌呤

D-色氨酸Rig-I (D14G6) Rabbit mAb硫代酰

D-酪氨酸TAB2 (C88H10) Rabbit mAb吲哚-羧酸甲酯

D-組氨酸JunB (G53) Antibody2,6-二溴-氨基吡啶

D-氨酸甲酯鹽酸鹽Proin G Agarose Beads2,二羥基吡咯[2,d]嘧啶

D-氨酸叔丁酯鹽酸鹽Proin G Agarose Beads6-氟吲哚

D-精氨酸Phospho-5-Lipoxygenase (Ser271) Antibody5-氟吲哚

非對稱二甲基精氨酸Mouse Immune Cell Phenotyping IHC Antibody Sampler Kit芐,

N'-硝基-D-精氨酸Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) Antibody5-氟-2-甲基吲哚

D-天冬酰，一水Ingrin α6 Antibody1,二硫-2,5-二

D-天冬氨酸Phospho-SHP-2 (Tyr542) AntibodyN6-甲?；汆堰?/span>

D-天冬氨酸叔丁酯Phospho-SHP-2 (Tyr542) Antibody2,二-5-硝基三氟

D-谷氨酸SHP-2 Antibody三氟甲基-溴甲

TLCK(進分)JunB (C37F9) Rabbit mAb2-氟-5-硝基三氟甲

甘氨酰-L-酪氨酸；甘洛二肽JunB (P169) Antibody對氟99%
轉(zhuǎn)基因品系水稻LLRice62染料法qPCR試劑盒TLC法鑒別98%100mlEBNA1 IgG ELISA kit長梗秦艽

澳洲茄；α-澳洲茄,茄解  英文名稱：Solasonine; alpha solasonine, solasonine   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 *狀腺素T3抗體

TNFsR I (Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor I ) ELISA KIT  小鼠腫瘤壞死子可溶性受體ⅠCAS號：86541744Smad同源物7檢測試盒100ml熱休克蛋白70檢測試盒cysticercosiscellulosae

TLC法鑒別98%100mlEpstein Barr nuclear antigens 3 IgG antibody ELISA Kit長春質(zhì)

二氫草莓;2-Methylvaleri 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢 UVM添加劑/UVM Supplement添加到HB4195中，用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)10毫升國產(chǎn)/進口

Casp3 ELISA Kit  大鼠胱天蛋白酶3CAS號：86541744裂殖子表面蛋白1檢測試盒500ml囊尾蚴病檢測試盒antisinglestrandedDNAantibody

TLC法鑒別97%,ee值>98%100mlEpstein Barr nuclear antigens 3 IgM antibody ELISA Kit長春新

原 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 型乙酰膽受體δ/AChRδ抗體 Fetuin-A ELISA Kit 胎球蛋白A(Fetuin-A)ELISA試劑盒

MES buffer(0.05mol/L,pH6.0)53167−20°C干燥避光保存BOCD高氨HPLC≥98%胰高血糖素樣肽2受體檢測試盒20mgSAX1試,表面活性, 十二烷基磺鈉