Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒公司*的商品：生物素化羊抗人IgA骨碎補（標準品）Human
生物素化兔IgG固公果根（標準品）Human, Mouse, Rat
生物素化小鼠IgG瓜蔞（栝樓）（標準品）Human, Mouse
熒光素標記兔抗FITC瓜蔞皮(雙邊栝樓（標準品）Human
紅色熒光素羅丹明標記鏈霉親和素瓜蔞皮（栝樓）（標準品）Human, Mouse
羅丹明標記

培養(yǎng)操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

產(chǎn)品屬于：

商品介紹：

試劑盒組份：

Annexin V-EGFP—————————100μl

Annexin V-EGFP結(jié)合液——————12ml

碘化丙啶染色液—————————220μl

Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內(nèi)側(cè)，即與細胞漿相鄰的一側(cè)。在細胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標記的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-EGFP可以進入到細胞漿內(nèi)，與位于細胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細胞呈現(xiàn)綠色熒光。

綜上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活細胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的細胞僅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈陰性；壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。

儲存條件：4℃避光，有效期6個月。
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒轉(zhuǎn)鐵蛋白

其他鐵傳遞蛋白

英文名稱：TRF

其他英文名稱：Transferrin human；TF

產(chǎn)品規(guī)格：BR，98%

包裝：10毫克/100毫克

CAS號：11096-37-0

分子量：76-81KDa

含量：≥98%

鐵含量：300～600 μg/g

Total impurities：<1 EU/mg Endotoxin

性狀：桃紅色至褐色粉末，一種與金屬結(jié)合的糖蛋白，每一分子與兩個鐵原子結(jié)合，起鐵的傳遞作用。電泳分類為β1球蛋白。溶于水：50mg/ml

用途：生化研究。為單鏈糖蛋白，含糖量約6%。TRF可逆地結(jié)合多價離子，包括鐵、銅、鋅、鈷等。

保存：2～8℃