商品介紹:
Caspase 3,即Cysteine-requiring Aspartate Protease 3,也稱CPP32、Yama或apopain,屬于Caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily),系一種在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶,也是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究最多的一個(gè)Caspase。 Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9,且可以直接特異性剪切多種Caspase底物,包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)、ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)、gelsolin和fodrin等。這些由Caspase 3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分。另外,caspase 3在細(xì)胞核凋亡和細(xì)胞起泡(Cell blebbing)過程中也起到了關(guān)鍵作用,包括染色質(zhì)固縮(chromatin condensention),DNA片段化(DNA fragmentation)等。 |
Caspase 3 Assay Kit, Colorimetric是一款簡(jiǎn)單快速檢測(cè)細(xì)胞或組織內(nèi)Casepase 3活性的試劑盒,其檢測(cè)原理是基于Casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收,從而可以通過測(cè)定吸光度來檢測(cè)Caspase 3的活性(黃色產(chǎn)物與Caspase 3酶的活性成正比)。 另外,本試劑盒中還提供了Caspase 3催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,以此作為定量caspase 3酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。
試劑盒組份:
Lysis Buffer裂解液————8ml
Assay Buffer檢測(cè)緩沖液——8ml
Ac-DEVD-pNA(2mM)—————200μl
pNA(10mM)————————200μl
儲(chǔ)存條件:-20℃
產(chǎn)品屬于:
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移3(LPCAT3)elisa試劑盒英文名稱:LPCAT3 ELISA Kit貓眼綜合征染色體候選基因6抗體包裝25g
溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移2(LPCAT2)elisa試劑盒英文名稱:LPCAT2 ELISA Kit21號(hào)染色體開放閱讀框2抗體包裝25mg
溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移1(LPCAT1)elisa試劑盒英文名稱:LPCAT1 ELISA Kit9號(hào)染色體開放閱讀框86抗體包裝25G
溶血磷脂受體3(LPAR3)elisa試劑盒英文名稱:LPAR3 ELISA Kit21號(hào)染色體開放閱讀框128抗體包裝5G
溶體性磷2(ACP2)elisa試劑盒英文名稱:ACP2 ELISA Kit6號(hào)染色體開放閱讀框62抗體包裝100g
妊娠關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)elisa試劑盒英文名稱:PAPPA ELISA KitCCZ1蛋白抗體包裝500g
熱休克轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)elisa試劑盒英文名稱:HSF4 ELISA Kit腦蛋白5抗體包裝1g
熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)elisa試劑盒英文名稱:HSF1 ELISA Kit21號(hào)染色體開放閱讀框58抗體包裝5g
熱休克蛋白β8(HSPβ8)elisa試劑盒英文名稱:HSPβ8 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框43抗體包裝1g
熱休克蛋白β6(HSPβ6)elisa試劑盒英文名稱:HSPβ6 ELISA Kit9號(hào)染色體開放閱讀框43抗體包裝5g
熱休克蛋白β2(HSPβ2)elisa試劑盒英文名稱:HSPβ2 ELISA Kit幾丁質(zhì)3樣蛋白3抗體包裝100ml
熱休克蛋白40(HSP40)elisa試劑盒英文名稱:HSP40 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員2抗體包裝500ml
染色質(zhì)裝配因子1亞基B(CHAF1B)elisa試劑盒英文名稱:CHAF1B ELISA Kit趨化樣因子超家族成員2亞型1抗體包裝1g
染色質(zhì)域解旋DNA結(jié)合蛋白4(CHD4)elisa試劑盒英文名稱:CHD4 ELISA Kit18號(hào)染色體開放閱讀框1抗體包裝5g
染色框同源物3(CBX3)elisa試劑盒英文名稱:CBX3 ELISA Kit色c氧化VIIA亞型2抗體包裝100g
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:> 95%,BR主要組織相容性復(fù)合體,II類,DQα2試劑盒知母皂苷E;Anemarsaponin
蜜蜂生球擬酵母Torulopsis│apicola 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品周期依賴性激5試劑盒知母皂苷元;Sarsasapogenin
乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格:純度> 98%,BR,可用于培養(yǎng)周期依賴性激4試劑盒醉椒;Kavain
Caspase 3活性檢測(cè)試劑盒(比色法)乙維生A
其他醋維生A;維生A油醋酯;維生A醋酯;視黃醛乙鹽;醋維他命A;視黃乙酯;抗感染性維生乙酯;維生A乙酯
英文名稱:Vitamin A acetate
其他英文名稱:Retinol acetate;all-trans-Retinyl acetate;all-trans-Vitamin A acetate;Antixerophthalmic vitamin acetate;Retinyl acetate
產(chǎn)品規(guī)格:BR,32.5萬IU/g
包裝:25克/100克
產(chǎn)品規(guī)格:USP級(jí),50萬u/g
包裝:25克/100克
CAS號(hào):127-47-9
C22H32O2=328.49
級(jí)別:BR
含量:325000~374000IU/g
A紫外吸收:合格
干燥失重:≤8.5%
性狀:黃色或橙色結(jié)晶粉末或薄片。無熔點(diǎn),約250℃色變深并炭化。溶于熱的稀鹽和硫,略溶于乙、酚、吡啶、氫氧化堿和碳?jí)A溶液,少溶于乙和丁,微溶于甲,極微溶于冷水(25℃,0.0016mG/ml),沸水中約可溶1%,不溶于酮、和。1G葉于10ml水中的懸浮液,pH 4.0~4.8。與碳?xì)溻c制備的溶液pH6.5~6.8。大吸收波長(zhǎng)(pH 13):256、283、368nm(logε4.43、4.40、3.96)。比旋光度[α]25D +23°(c=0.5,0.1mol/L氫氧化鈉溶液中)。
用途:生化研究。
保存:2~8℃,避光,避免與金屬接觸