注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:無乳鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013461
產(chǎn)品規(guī)格: 50次
產(chǎn)品分類:純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。
Human ALR ELISA Kit 人肝再生增強(qiáng)因子Multi-class antibodies: 96T
SSTR4 生長抑受體4抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat human IgM 羊抗人IgM 1mg
Human c-fos ELISA Kit 人c-fos 96T
NFAT4 核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白3抗體 0.2ml
BCL6B BCL6B抗體 0.1ml
SSTR4 生長抑受體4抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
SEP1(Human selenoprotein 1) ELISA Kit 人硒蛋白1Multi-class antibodies: 48T
MK1/2(MAPKK1) 原活化蛋白激激1抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh KCNC4/KV3.4 離子通道蛋白Kv3.4抗體 0.2ml
Human paramyxovirus parotitis IgM ELISA Kit 人腮腺炎病毒IgM 96T
PTCHD2 多通道膜蛋白PTCHD2抗體 0.2ml
CENPP 著絲粒蛋白P抗體 0.2ml
MK1/2(MAPKK1) 原活化蛋白激激1抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit rat IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml
GDF1 生長分化因子1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh APOD 載脂蛋白D抗體 0.2ml
IL-6/FITC (mouse、rat) 熒光標(biāo)記白介6抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit MG IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
Melamine/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記三聚胺單克隆抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
無乳鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒金黃色葡萄球菌種屬: Staphylococcus│aureus提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物;凍結(jié)物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 致病菌檢測(cè)芯片培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
西弗冠孢酵母種屬: Stephanaascus│ciferrii分離基物: 豬盲腸提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0436生長條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法
Amycolatopsisdecaplanina種屬: Amycolatopsisdecaplanina分離基物: 土壤安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 158生長條件: 28℃
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌種屬: Zymomonas│mobilis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 酒精。培養(yǎng)基: CM0199生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
化腺苷活化蛋白激(AMPK)ELISA試劑盒2,5-二噻吩 98%氫氧化鋁 99.99%,2~10μm利拉萘酯(標(biāo)準(zhǔn)品)
化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)ELISA試劑盒3,4-二甲氧基噻吩 97%氫氧化鋁 99.99%,0.05~1.5μm萘普生鈉
化糖原合激3β(pGSK3B)ELISA試劑盒3-甲氧基噻吩 98%納米氧化鎂 50nm,球形,99.9% metals basis萘普生鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)
化糖原合成激3(pGSK-3)ELISA試劑盒2-甲氧基噻吩 99%二氧化鋯 99.99% metals basis,D50:0.2~0.4μm齊多夫定
化肌球蛋白輕鏈(PMLC)ELISA試劑盒2-硝基噻吩 98%納米氧化鋅 99.9% metals basis,30±10nm齊多夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)
化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒四溴噻吩 99%5-氨基乳清 98%尼可地爾
化蛋白激C(P-PKC)ELISA試劑盒噻吩-2,3-二甲 98%1,3-二甲基-5-吡唑酮 96%尼可地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)
化蛋白激B(P-PKB)ELISA試劑盒鹽胍 分子生物學(xué)級(jí),99.5%0.99煙
化cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(pCREB1)ELISA試劑盒鹽胍 99.5% 分析標(biāo)準(zhǔn)品利福平;利發(fā)霉
甘油變位2(PGAM2)ELISA試劑盒鹽胍 蛋白變性,99.5%0.92利福平(標(biāo)準(zhǔn)品)
趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒鹽胍 AR,99.0%鹽金剛 99%ε-聚賴氨
抗原6復(fù)合物基因座A(Ly6a)ELISA試劑盒鹽胍 CP,98.0%鹽金剛 99%普羅雌烯
功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒硫胍 99%D-氨甲酯鹽鹽 98%波生坦(合物)
功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒聚烯酰 非離子型,分子量:200萬-1400萬甲氧羰酰琥珀酰亞 98%波生坦合(標(biāo)準(zhǔn)品)
β(LTB)ELISA試劑盒2,4-二氧乙 97%抑肽 3-8 TIU/mg福沙吡坦二甲葡(MK-0517)
α(LTA)ELISA試劑盒2,4-二氧乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品α-糜蛋白 1000 usp u/mg普拉格雷