轉(zhuǎn)基因品系番茄8805R染料法qPCR試劑盒

服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
酸甲酯(色譜級(jí))Nav1.5 (D9J7S) Rabbit mAb羧基噠

二甲酸酯(色譜級(jí))Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)基噻吩

異戊烷(色譜級(jí))c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)氨基-5-甲基吡啶

甲(色譜級(jí))Ras (G12D Mutant Specific) (D8H7) Rabbit mAb正丁基

對(duì)甲酰(色譜級(jí))SF3B1 (D7L5T) Rabbit mAb2-脫氧-2,2-二氟戊呋喃糖-1-酮 3,5-二安息香酸鹽

硝烷(色譜級(jí))CART (D6M2M) Rabbit mAb四(3,5-二叔丁基-羥基)酸季戊四酯

正辛烷(色譜級(jí))LEF1 (C12A5) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-環(huán)基哌

2-戊酮(色譜級(jí))p38 MAPK (D13E1) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)6-甲基-2-基吡啶

戊酮(色譜級(jí))EpCAM (D9S3P) Rabbit mAb (IHC Preferred)2,二氟三氟甲

正(色譜級(jí))TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氟-2-甲

正戊烷(色譜級(jí))ELMO1 (D4K2E) Rabbit mAb5--2-甲酸

石油(色譜級(jí))Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-6-甲氧基甲酸

石油(色譜級(jí))MPC1 (D2L9I) Rabbit mAbD-亮氨

石油(色譜級(jí))BiP (C50B12) Rabbit mAb (PE Conjuga)2，二溴

三(色譜級(jí))RAP80 (D1T6Q) Rabbit mAb5-甲氧基-2-

叔丁(色譜級(jí))S6 Ribosomal Proin (5G10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)硝地平

異辛烷(色譜級(jí))ELL (D7N6U) Rabbit mAb2-喹噁啉

異辛烷(色譜級(jí))E-Cadherin (4A2) Mouse mAb2-[(羥基氨基)亞氨基]-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
轉(zhuǎn)基因品系番茄8805R染料法qPCR試劑盒TLC法鑒別97%5*1mlβglucosidase ELISA Kit

二氫辣椒（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Dihydrocapsaicin 香菇 Lentinula edodes黑曲霉 Aspergillus niger

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 安五酯素

TLC法鑒別>97.0%(GC)10mlβglucuronidase,βGD ELISA Kit

綿馬貫眾素ABBA 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 人沙漠猬蛋白同源物(DHH)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠一氧化合酶運(yùn)輸因子(STRIN)ELISA試劑盒，英文名：STRIN ELISA Kit

IFN Gamma(Human Interferon Gamma) ELISA Kit  人γ干擾素CAS號(hào)：90244841抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體檢測(cè)試盒10ml組胺檢測(cè)試盒Tissuefactor

TLC法鑒別>97.0%(GC)5mlBetaHydroxybutyric Acid,βOHB ELISA Kit

DST 質(zhì)量規(guī)格：BR DST 人神經(jīng)元細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

LN(Mouse Laminin) ELISA Kit  小鼠層連蛋白/板層素CAS號(hào)：9016006 抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體檢測(cè)試盒10*1L組織子檢測(cè)試盒cephalin
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。