參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):人皰疹病毒8型染料法熒光定量PCR試劑盒50次
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013529
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類(lèi):純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
Human elongin A,EloA ELISA Kit 人延伸蛋白AMulti-class antibodies: 48T
Sox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Mouse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
ASGPR(Human asialoglyco protein receptor) ELISA Kit 人去唾液糖蛋白受體 96T
Phospho-eNOS (Ser1177) 磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體 0.1ml
Bcl 2 like 13 protein Bcl2樣凋亡蛋白13抗體 0.2ml
Sox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
5-HT(Human 5-Hydroxytryptamine) ELISA Kit 人5羥色胺Multi-class antibodies: 48T
LIX1 LIX1抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh KLHL8 Kelch樣蛋白8抗體 0.2ml
PGI(Human prostacycline) ELISA Kit 人前列環(huán) 96T
Protein A 重組金黃色葡萄球菌蛋白A抗體 0.1ml
Cullin 4B CUL4B蛋白抗體 0.1ml
LIX1 LIX1抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Donkey human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗人IgG 0.1ml
GFM1 延伸因子G1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Aromatase 芳香化抗體 0.1ml
IFN- Gamma/FITC(Interferon Gamma) 熒光標(biāo)記抗大、小鼠IFN-γ抗IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Monkey IgG/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml
CD4/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記CD4抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
人皰疹病毒8型染料法熒光定量PCR試劑盒50次普通變形桿菌種屬: Proteus│vulgaris提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
芽孢桿菌種屬: Bacillus│atrophaeus提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 防霉。培養(yǎng)基: CM0002生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
雌(E)ELISA試劑盒6-氨基-1-己 97%4-氟 99%油鈉(>98%,BR )
雌二受體(ER)ELISA試劑盒烯基基硅 98%1-氟-4- 98%四甲基化銨(>99%,BR)
雌二(E2)ELISA試劑盒丁炔二 98%4-氟酚 99%1-辛磺鈉(>98%,BC )
垂體腺苷環(huán)化激活肽(PACAP)ELISA試劑盒4-溴-2-氟 99%4-羥基-環(huán)己甲乙酯 98%2,3,5三甲(>97%,植物級(jí))
垂草扁桃(VMA)ELISA試劑盒甲基基硅 98%膽甲酯 97%3-吲哚丁(>98%,植物級(jí))
串珠(HSPG2)ELISA試劑盒2,6-二氟 97%?;敲撗跄?98%乙鈣一(>98%,BR)
穿孔/成孔蛋白(PRF1/PFP)ELISA試劑盒炔乙酯 99%甘膽鈉 98%三鈣(>98%,BR)
穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒2-氟-4-羥基 99%甘氨脫氧膽鈉 97%DL-硒代蛋氨(USP)
穿孔(PF)ELISA試劑盒N-甲基-1-萘鹽鹽 97%鵝去氧膽鈉 97%蜜二糖
遲現(xiàn)抗原4(VLA4)ELISA試劑盒炔 98%膽鈉 98%草鈉(>98%,BC)
程序性死亡因子4(PDCD4)ELISA試劑盒三基銻 97%1-乙基-2-吡酮 99%鎢鈉二(>98%,BR)
程序性死亡因子配體1(PD-L1/CD274)ELISA試劑盒2-(硅基)乙 98%γ -丁內(nèi)酯 AR, ≥99%丁二酐(>98%,BR)
程序性死亡-1(PD-1)ELISA試劑盒海藻 CPγ -丁內(nèi)酯 >99.9% (GC)四乙基化銨(>98%,BR)
成纖維生長(zhǎng)因子8(FGF8)ELISA試劑盒海藻 藥用級(jí)N-甲基吡咯酮 AR,99.0%吐溫60
成纖維生長(zhǎng)因子6(FGF6)ELISA試劑盒纖維粉 粒徑:90μmN-甲基吡咯酮 CP,98.0%甲噻;賽拉
成纖維生長(zhǎng)因子4(FGF4)ELISA試劑盒纖維粉 粒徑:50μmN-甲基吡咯酮 for HPLC, ≥99.5%酵母多糖 A(>98% (HPLC),BC)
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。