組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例) 1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。 2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。 3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。 4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 | 二、樣品DNA的制備 8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取, 多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照), 一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。 可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。 9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒。 | 三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行) 10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。 11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加) |
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
Leptin/FITC 熒光標(biāo)記瘦抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
SSTR2 /FITC 熒光標(biāo)記生長(zhǎng)抑受體2(SSTR2)抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AGFG1 艾滋病病毒復(fù)制結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
Rabbit Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 0.1ml
GPR70 G蛋白偶聯(lián)受體70抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml
SSTR2 /FITC 熒光標(biāo)記生長(zhǎng)抑受體2(SSTR2)抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
PGE1(Human Prostaglandin E1) ELISA Kit 人前列腺EMulti-class antibodies: 48T
LPLUNC1 鼻咽癌癌基因抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh KLF9/BTEB1 轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體 0.1ml
CG ELISA Kit 大鼠絨毛膜促性腺 96T
PSME3 蛋白體激活因子PA28γ抗體 0.2ml
CNDP1 肌肽二肽1抗體 0.1ml
LPLUNC1 鼻咽癌癌基因抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit pig IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
GCP2 粒細(xì)胞趨化蛋白2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh APOE4/Apolipoprotein E4 載脂蛋白E4抗體 0.2ml
IL-4R/FITC 熒光標(biāo)記白細(xì)胞介4受體抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit MG IgG/Bio 生物標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml
Melamine/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記抗三聚胺抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
流行性出血熱病毒RT-PCR試劑盒弗勞地拘櫞桿菌種屬: Citrobacter│freundii提供形式: 其他安全等級(jí): 3模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌種屬: Yersinia│enterocolitica提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 血清學(xué)分群(型) 41,42 生物1培養(yǎng)基: CM0116生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
福氏志賀氏菌種屬: Shigella│flexneri提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: B 4b IV 6...培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)ELISA試劑盒甲乙酯 ≥99%, FCC2-氨基-3-甲 98%化羅丹明110;羅丹明110
可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)ELISA試劑盒乙二雙(2-氨基乙基)四乙 AR2-溴-3-硝基吡啶 98%羅丹明123
可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒乙二雙(2-氨基乙基)四乙 用于分子生物學(xué), ≥99.0%4-基甲 99%曲美布汀
可溶性粘附分子(Sam)ELISA試劑盒無(wú)甲 AR,98%N-二甲基氮雜環(huán)丁-3- 98%6-羧基四甲基羅丹明;6-TAMRA
可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒乙二縮雙(鄰氨基酚) 98%4-溴-2-甲氧基酚 98%6-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞酯,6-TAMRA, SE
可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA試劑盒乙二縮雙(鄰氨基酚) CP3-溴甲 99%卵清蛋白;雞蛋白蛋白
可溶性血管內(nèi)皮粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒十七 AR,95.0%α-溴 97%米替福新
可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒靛藍(lán)二磺鈉 Biological stain3-溴-4-甲基吡啶 97%米替福新(標(biāo)準(zhǔn)品)
可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒三化 AR,97.0%N-Boc-4-甲 97%1-PP1萘
可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(sVEGF R1)ELISA試劑盒式碳鉛 AR,99.0%2,8-雙(三氟甲基)-4-羥基喹啉 99%阿利克侖半富馬鹽
可溶性胸苷激1(TK1)ELISA試劑盒式碳鉛 ACS3-溴磺酰 98%氟尼考,氟甲砜霉
可溶性腺苷環(huán)化(sAC)ELISA試劑盒發(fā)煙硝 AR二乙基膦?;沂宥□?95%氟尼考(標(biāo)準(zhǔn)品)
可溶性因子受體(sCKR)ELISA試劑盒間酚 IND2-溴-4-氟甲 98%埃博霉 D
可溶性間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒鹽萘乙二 AR,98%4-溴楊 97%左亞葉鈣;甲酰四氫葉鈣
可溶性髓系觸發(fā)受體-1(sTREM-1)ELISA試劑盒黑色(溶) Biological stain4-溴-2-(三氟甲基)甲 97%阿法替尼雙馬來(lái)鹽
可溶性瘦受體(sLR)ELISA試劑盒鹽萘乙二 ACS, >98%3-溴 98%胞鈉;5-胞苷二單鈉鹽
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。