培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
用途:
專門用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,又稱同時(shí)偶聯(lián)法。
注意事項(xiàng):
堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳中。油鏡下計(jì)數(shù)101個(gè)中性粒細(xì)胞,求出百分比和積分。非特異性反應(yīng)少,結(jié)果可靠。
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
蓮心堿高鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3,4-DihydroxybenzaldehydeLRIG1抗體包裝25mg
蓮須(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3,4-DihydroxybenzaldehydeLRIG3抗體包裝5mg
蓮子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Thiamphenicol glycinate HCl肝腸鈣粘連蛋白抗體包裝10g
蓮子心(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethyl 2,4-dihydroxy-6-methylnicotinate透明質(zhì)受體抗體包裝50g
兩面針(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Enduracidin17號(hào)染色體開放閱讀框82抗體包裝10MG
亮菌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-Catechin hydrate轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體包裝100mg
遼東楤木皂苷X(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-Catechin hydrate淋巴抗原76抗體包裝500mg
了哥王(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-Catechin富含亮重復(fù)序列LRP15抗體包裝1g
烈香杜鵑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vitamin B6 Hydrochloride富含亮重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白1抗體包裝250mg
烈香杜鵑油(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: vitamin B6層粘蛋白α2抗體包裝1g
林生續(xù)斷苷I英文名稱: Fidaxomicin內(nèi)皮脂肪抗體包裝250mg
林澤蘭內(nèi)酯B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-Bicuculline可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1抗體包裝250mg
林澤蘭內(nèi)酯C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-Bicuculline層粘連蛋白β2抗體包裝100g
林澤蘭內(nèi)酯D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (?)-Huperzine A白衍生化學(xué)吸引抗體包裝500g
靈仙新苷英文名稱: EGC T淋巴易位蛋白2抗體包裝1g
蟬花1-10Isaria│cicadae Miq. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR抗磷脂酰乙抗體試劑盒二氫;Hydrocoumarin
栓孔菌Trametes│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥90%;for fluorescence抗磷脂酰乙抗體試劑盒5,7-二羥基色原;5,7-dihyd
: J1資源名稱: 傷寒沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:用于熒光標(biāo)記抗磷脂酰乙抗體試劑盒N,N’-二基蝙蝠葛堿化物 ;N,N
中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)順丁烯二鈉
其他 馬來(lái)鈉;(Z)-2-丁烯二單鈉鹽;失水蘋果氫鈉;順丁烯氫鈉
英文名稱: Maleic acid sodium salt
其他英文名稱: cis-Butenedioic acid sodium salt;Toxilic acid sodium salt
產(chǎn)品規(guī)格: BR,99%
包裝:25克
CAS號(hào):3105-55-3
C4H3O4Na=138.05
級(jí)別:BR
含量:~99.0%
水分:≤29.0%
鈉鹽:15~17%
性狀:粉末,溶解度:Clear colorless solution at 50mg/ml in water
用途:生化研究。
保存:RT