轉基因品系南瓜ZW20染料法qPCR試劑盒

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服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)輪環(huán)藤寧

β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4

脫落酸(標準品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯

脫落酸(高純)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氫-2-萘

脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈TDP43 (A260) Antibody3,5-二羥基甲

胃蛋白酶(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三銀

核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯

S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴煙酸甲酯

胃蛋白酶(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯試劑

蛋白酶K(進分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)哌啶甲酸甲酯

蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羥基甲

胰凝蛋白酶抑制劑CMTM6 Antibody2-溴-5-羥基甲

亮抑蛋白酶肽(進口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody異煙酸甲酯

胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二酯

巖藻糖；L-巖藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮鹽酸鹽

果膠酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸酯

β-淀粉酶(70萬u/ml液體)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸酯鹽酸鹽

β-淀粉酶(酶活5萬粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基二
轉基因品系南瓜ZW20染料法qPCR試劑盒500mg1g天狼星紅BBTobacco mosaic virus

構樹A（標準品） 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品  Broussonetine A

標準品,中藥標準品, 3β酰氧基7,25甘遂二烯24(R)醇

1g5g虎紅Catalase

兒茶素;Cianidal 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg FBXL11蛋白抗體 γLPH ELISA Kit γ-促脂解激素(γLPH)ELISA試劑盒

標準品,中藥標準品, 麻楓樹酚B

100mg1g虎紅carbonic anhydrase 6

2'-脫氧鳥苷-3'-單二鈉 質量規(guī)格：>98%,BR 2'-Deoxy-3'-guanylic acid disodium salt 大鼠牙細胞*培養(yǎng)基桿菌屬 Lactobacillus sp.

試,表面活性, 偶氮脒類引發(fā)V50