操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
用途: 檢測細(xì)胞自噬
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儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,12個(gè)月
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
肉蓯蓉苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4'-Hydroxyazobenzene-4-carboxylic Acid Hydrate谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移κ抗體包裝50g
肉豆蔻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Carboxymethoxylamine Hemihydrochloride半乳糖激1抗體包裝1g
肉豆蔻木脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Girard's Reagent P糖原蛋白2抗體包裝5g
肉豆蔻,十四烷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione磷半乳糖尿苷轉(zhuǎn)移1抗體包裝1ml
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-tert-Butyl-α-phenylnitrone糖原蛋白1抗體包裝5g
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 16-DOXYL-stearic Acid Free Radical葡萄糖合成2抗體包裝250mg
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CLA谷草轉(zhuǎn)2抗體包裝10g
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MCLA葡萄糖-6磷脫氫抗體包裝250g
肉桂葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FCLA Free Acid葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體包裝50g
乳香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Red-CLA葡萄糖合成1抗體包裝1g
瑞香/祖師麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: IsoluminolG蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體包裝250mg
塞骨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bis[3,4,6-trichloro-2-(pentyloxycarbonyl)phenyl] Oxalate甘油激3抗體包裝25g
噻二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Disodium 8-Amino-1,3,6-naphthalene 3sulfonate Hydrate高爾基體磷蛋白3樣蛋白抗體包裝1g
噻二苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Coumarin 102磷化谷受體1抗體包裝5g
賽門苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Coumarin 314G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝1g
細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)葡萄穗霉Stachybotrys│chartarum 質(zhì)量規(guī)格:>98%尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移1試劑盒蘿卜硫苷;Glucoraphanin
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%鳥苷結(jié)合蛋白4試劑盒藜蘆基;3,4-Dimethoxybe
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:含量測定鳥苷交換因子試劑盒藜蘆;Veratraldehyde