參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:森林腦炎病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P013467
產(chǎn)品規(guī)格: 50次
產(chǎn)品分類(lèi):純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
LDL-R/FITC 熒光標(biāo)記低密度脂蛋白受體抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
SSTR1/FITC 熒光標(biāo)記生長(zhǎng)抑受體1(SSTR1)抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AGFG2 HIV-1病毒復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
Rabbit Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 0.1ml
GPR71 G蛋白偶聯(lián)受體71抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgG/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml
SSTR1/FITC 熒光標(biāo)記生長(zhǎng)抑受體1(SSTR1)抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
sm Actinin- Alpha(Human skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit 人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白αMulti-class antibodies: 48T
MMP-14 基質(zhì)金屬蛋白-14抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Intra Acrosomal Protein/SP10 頂端體蛋白10抗體 0.2ml
IGFBP-2 ELISA Kit 大鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2 96T
PSMD9 蛋白調(diào)解因子9抗體 0.2ml
CPA3 肥大細(xì)胞羧肽A3抗體 0.2ml
MMP-14 基質(zhì)金屬蛋白-14抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
GATA5 GATA結(jié)合蛋白5抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ApoER2 載脂蛋白E2受體抗體 0.1ml
IL-4/FITC 熒光標(biāo)記抗白介4抗體(人)IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit MG IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml
Proteasome 20S LMP7 /FITC 熒光標(biāo)記低分子質(zhì)量蛋白7抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
森林腦炎病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒花楸本森頓酵母種屬: Bensingtonia│sorbi分離基物: Sorbus pohuashanensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0013生長(zhǎng)條件: 17℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
木賊鐮孢種屬: Fusariumequiseti分離基物: 花菜籽安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 轉(zhuǎn)化甾體培養(yǎng)基: 14,17生長(zhǎng)條件: 25~28℃
肉桂色曲霉種屬: Aspergillus│cinnamomeus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0015生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒亞硝 CP,95%5-基吲哚 99%硬脂紅霉
可溶性脂A2(sPL-A2)ELISA試劑盒四草,二 PT2-異煙 97%精
可溶性間皮相關(guān)肽(SMRP)ELISA試劑盒偏 AR肉桂酰 97%亞精
可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒鍺試劑 AR3-肉桂 98%亞精鹽
可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒鍺試劑 97%2-芐 99%多球殼菌;嗜熱菌殺酵母(來(lái)源于無(wú)孢霉群)
可溶性核因子κB受體活化因子(sRANK)ELISA試劑盒高 99.99% metals basis2--5-甲 99%亞精鹽鹽
可溶性凋亡相關(guān)因子配體(sFASL)ELISA試劑盒N-基(釩試劑) AR,95%2--5-甲 97%N-甲?;?DL-精氨酰-4-鹽鹽
可溶性淀粉前體蛋白α(sAPPα)ELISA試劑盒N-基(釩試劑) 98%4-吲哚 98%栗精
可溶性蛋白185(sp185/HER-2)ELISA試劑盒焦銻 AR,99.0%2-基甲 98%精四鹽鹽;鹽精
可溶性彈性蛋白片段(sELAF)ELISA試劑盒1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 AR,90.0% 2-甲硫基-5-嘧啶-4-甲 95%D-熒光鹽,D-蟲(chóng)熒光鹽
可溶性半乳糖苷結(jié)合凝集3(Lgals3)ELISA試劑盒1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 98%2--4-硝基吡啶 98%鹽替丁
可溶性白抗原G(sHLA-G)ELISA試劑盒多乙烯多 AR4-基吲哚 98%鹽雷丁(標(biāo)準(zhǔn)品)
可溶性白介7受體(sIL-7R)ELISA試劑盒檸檬二氫 AR,98.0%2--6-氟 98%熒光鈉
可溶性P選擇(sP-selectin)ELISA試劑盒氟氫化 AR,99.0%2--N,N-二甲基乙酰 97%D-蟲(chóng)熒光鈉鹽;D-熒光鈉鹽
可溶性OX40L(sOX40L)ELISA試劑盒氟氫化 CP,98.0%4--2-三氟甲基喹啉 97%2ˊ,7ˊ-二熒光鈉鹽
可溶性E選擇(sE-selectin)ELISA試劑盒N-基硫脲 98%2--4-吡啶 95%天青I;天青B