一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)

一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)正在出售的產(chǎn)品：生物鐘KAT13D蛋白抗體佛手柑素;香檸檬素;佛手柑亭;香檸檬亭（標(biāo)準(zhǔn)品） Nigericin sodium
Kelch樣蛋白36抗體佛司可林(標(biāo)準(zhǔn)品) Nonactin
離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白KCC4抗體呋拉茶 Trichostatin A from Streptomyces sp
磷化離子通道蛋白Kv1.3抗體弗朗鼠李皮（標(biāo)準(zhǔn)品） Aceto

中文名稱：一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)

英文名稱：One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|50次

發(fā)貨周期：1～3天

試劑盒組份：

TdT酶——————————40μl

熒光標(biāo)記液————————960μl

TdT酶稀釋液(選用)————500μl

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標(biāo)記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理。注：FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫，實(shí)際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。

本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。

(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色明亮，可以在單細(xì)胞水平檢測到細(xì)胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細(xì)胞凋亡。

(2)特異性：TUNEL檢測時通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。

(3)快速：僅需約1-2個小時即可完成。

(4)方便：只需一步染色反應(yīng)，洗滌后即可觀察，不必使用二抗等進(jìn)行多步操作。

(5)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。

TUNEL法特異性檢測細(xì)胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。

極少數(shù)細(xì)胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時檢測多個凋亡指標(biāo)。

儲存條件：-20℃。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)elisa試劑盒英文名稱：Cyclin-D2 ELISA KitAICAR?；D(zhuǎn)移酶抗體包裝5MG

細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)elisa試劑盒英文名稱：Cyclin-D1 ELISA Kit磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體包裝1g

細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS-3)elisa試劑盒英文名稱：SOCS-3 ELISA KitATP5E蛋白抗體包裝250mg

細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)elisa試劑盒英文名稱：SOCS-1 ELISA KitATP5G2蛋白抗體包裝25g

細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)elisa試劑盒英文名稱：ERK ELISA KitATP6V0D2蛋白抗體包裝5g

(Cyt-C)elisa試劑盒英文名稱：Cyt-C ELISA KitATP6V1B2蛋白抗體包裝1g

細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)elisa試劑盒英文名稱：CYFRA21-1 ELISA KitATPIF1蛋白抗體包裝5g

細(xì)胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)elisa試劑盒英文名稱：CK 18-M65 ELISA KitAttractin蛋白抗體包裝10mg

細(xì)胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)elisa試劑盒英文名稱：CK 18-M30 ELISA Kit磷酸化有絲分裂激酶B抗體包裝50mg

細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)elisa試劑盒英文名稱：ICAM-3/CD50 ELISA Kit肌動蛋白相關(guān)蛋白M1抗體包裝100mg

細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)elisa試劑盒英文名稱：ICAM-2/CD102 ELISA KitALKB蛋白抗體包裝1g

細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)elisa試劑盒英文名稱：ICAM-1/CD54 ELISA Kit乙酰?；D(zhuǎn)移酶1抗體包裝5g

細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)elisa試劑盒英文名稱：CTLA-4/CD152 ELISA Kit磷酸化β-肌動蛋白抗體包裝250g

硒蛋白M(SELM)elisa試劑盒英文名稱：SELM ELISA Kit磷酸化腎上腺素能受體β2/β2-AR 抗體包裝25g

戊糖素(Pentosidine)elisa試劑盒英文名稱：Pentosidine ELISA Kit磷酸化腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體包裝5g

激活素受體相互作用蛋白1抗體白介素6(IL6)RTA-408 是一種抗氧化炎癥調(diào)節(jié)劑 (AIM)，可激活 Nrf2 并抑制一氧化氮 (NO)。RTA-408 通過抑制 STING 依賴的
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)朱砂蓮甲素

其他 大黃素；1,3,8-三羥基-6-甲基蒽醌；瀉素；2-甲基-4,5,7-三羥基蒽醌；6-甲基-1,3,8-三羥基蒽醌；瀉鼠李樹皮

英文名稱： Emodin

其他英文名稱： 1,3,8-Tri?hydroxy-6-methyl?anthra?quinone；6-Methyl-1,3,8-tri?hydroxy?anthra?quinone；Emodol；Frangula-emodin

產(chǎn)品規(guī)格： AR，98%

包　　裝： 1克/5克/25克/100克

產(chǎn)品規(guī)格： 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

包　　裝： 20毫克

CAS號：518-82-1

C15H10O5=270.24

級別：AR

級別：分析標(biāo)準(zhǔn)品

含量：≥98.0%(HPLC)

性狀：橙色針狀結(jié)晶。溶于乙醇，略溶于、苯，不溶于水。溶于苛性堿水溶液、碳本酸鈉水溶液，氨溶液中顯櫻紅色。熔點(diǎn)：256-257℃

用途：生化研究。抑制NF -κB活化及粘附分子的表達(dá)。酪蛋白激酶2（CK2的）抑制劑

保存：2～8℃

操作規(guī)程：

1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000～0000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×00

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)