培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
用途: 細(xì)胞凋亡檢測(cè)、普通細(xì)胞核染色、常規(guī)的DNA染色。 注意事項(xiàng): Hoechst33258染色中l(wèi)eagene公司推薦采用該試劑。Hoechst33258是一種熒光染料,可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色,也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。
|
儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,12個(gè)月
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
沒藥(膠質(zhì)沒藥)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Indole高爾基體外周膜蛋白1抗體包裝50mg
沒藥(天然沒藥)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethyl octanoate高爾基體膜蛋白抗體包裝100mg
玫瑰花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Ethyl-1-hexanol高爾基體磷蛋白6抗體包裝100mg
玫瑰花總黃英文名稱: Ethyl palmitate高爾基SNAP受體復(fù)合物1抗體包裝25g
蒙花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Ethylhexanoic acid谷草酰乙轉(zhuǎn)1樣蛋白1抗體包裝5g
迷迭香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: p-AnisaldehydeG蛋白偶聯(lián)受體52抗體包裝1g
密蒙花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bis(2-ethylhexyl)adipate核膜糖蛋白210抗體包裝5g
蜜環(huán)菌粉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Disperse Blue 35GADD153抗體包裝1g
綿萆薢(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 9-MethylanthraceneG蛋白偶聯(lián)受體57抗體包裝10MG
綿大戟(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MCPAGSK-3結(jié)合蛋白FRAT2抗體包裝1g
綿馬貫眾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl oleate磷化內(nèi)收蛋白gamma抗體包裝250mg
綿馬貫眾ABBA(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isoeugenol生長(zhǎng)因子受體結(jié)合適應(yīng)蛋白抗體包裝100g
綿馬ABA(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: NonaneGARNL3蛋白抗體包裝25g
棉花根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-NaphtholTuberin樣蛋白1抗體包裝5g
棉子糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-NitrosodiethylamineX連鎖Charcot-Marie-Tooth變相關(guān)蛋白抗體包裝1g
炭疽芽孢桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR蘋果脫氫1試劑盒絡(luò)塞琳;Rosarin
北方梭囊孔菌Climacocystis│borealis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品平滑肌肌動(dòng)蛋白試劑盒毛兩面針;toddalolactone
球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR嘌呤核苷磷化試劑盒磷川芎;Tetramethylpyr
Hoechst33258染色液(1mg/ml)維生B5
其他D-泛鈣;本多生鈣;(R)-N-(2,4-二羥基-3,3-二甲基-1-氧代丁基)-β-鈣;N-(2,4-二羥基-3,3-二甲基丁酰)-β-基鈣;右旋泛鈣
英文名稱:VB5
其他英文名稱:D-calcium pantothenate;Vitamin B5;Pantothenic acid calcium salt;D-(+)-Pantothenic acid calcium
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:25克/100克/250克
CAS號(hào):137-08-6
C18H32CaN2O10=476.54
級(jí)別:BR
含量:≥99.0%
比旋光度:+25.5~+27.5°
PH:2.4~3.0
氮含量:16.9~17.6%
溶液色澤:≤Y7
干燥失重:≤0.5%
性狀:粉末。無氣味,味微咸苦。遇光漸變質(zhì),在空氣中穩(wěn)定。1g溶于約4.5ml水、90ml乙,微溶于,不溶于。10%水溶液pH3.2。性水溶液穩(wěn)定,即便在加熱至120℃(分解并升華)。大吸收波長(zhǎng)(0.1mol/L鹽)290nm(ε840)、(磷鹽緩沖,pH7)253、325nm(ε3700、7100)。低毒,半數(shù)致死量(大鼠,經(jīng)口)4000mg/kg。
用途:生化研究。
保存:RT,避光