中文名稱:Calcein-AM/PI活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒
英文名稱:Calcein-AM/PI Double Stain Kit
產(chǎn)品規(guī)格:500T
發(fā)貨周期:1~3天
Calcein-AM是一種對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑,發(fā)綠色熒光(Ex=490nm, Em=515nm)。因其在傳統(tǒng)的Calcein(鈣黃綠素)基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團(tuán),增加了疏水性,使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后,Calcein-AM(本身不發(fā)熒光)被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低,是適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針,而且不會(huì)抑制任何的細(xì)胞功能,如增殖和淋巴球的趨化性。 |
由于死細(xì)胞缺乏酯酶,Calcein-AM僅用于對活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測試和短期標(biāo)記。因此,Calcein-AM常常與死細(xì)胞熒光探針如碘化丙啶(PI)等聯(lián)合使用,同時(shí)進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的熒光雙重染色。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜,僅能穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核,并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(Ex=535 nm, Em=617 nm),因此PI僅對死細(xì)胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細(xì)胞。
本試劑盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的雙重染料,來進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色標(biāo)記,從而進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞水平的分析。根據(jù)我司優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)體系,單次就200μl細(xì)胞懸液進(jìn)行染色。
注意事項(xiàng)
1)由于Calcein-AM對濕度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量,分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
2)碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作時(shí)一定要注意防護(hù)。若接觸到皮膚,需要立即用自來水清洗。
3)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期12個(gè)月
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
谷半胱連接催化亞基(GCLC)elisa試劑盒英文名稱:GCLC ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝500mg
谷半胱連接(GCLM)elisa試劑盒英文名稱:GCLM ELISA Kit中心體蛋白55kDa抗體包裝5ml
孤啡肽(OFQ)elisa試劑盒英文名稱:OFQ ELISA Kit富含半胱與表皮生長因子樣蛋白2抗體包裝1g
高鐵血紅蛋白還原(MHBR)elisa試劑盒英文名稱:MHBR ELISA Kit骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體包裝5g
高遷移率族蛋白1(HMG1)elisa試劑盒英文名稱:HMG1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白4B(4C)抗體包裝1g
高密度脂蛋白(HDL)elisa試劑盒英文名稱:HDL ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝250mg
高分子量激肽原(HMWK)elisa試劑盒英文名稱:HMWK ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
高爾基蛋白73(GP73)elisa試劑盒英文名稱:GP73 ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝5g
干細(xì)胞因子受體(SCFR)elisa試劑盒英文名稱:SCFR ELISA Kit酪蛋白激1γ2抗體包裝10MG
干細(xì)胞因子(SCF)elisa試劑盒英文名稱:SCF ELISA Kit柯薩奇病蛋白受體B抗體包裝100g
干擾誘導(dǎo)T-細(xì)胞α亞族趨化劑(ITαC)elisa試劑盒英文名稱:ITαC ELISA Kit腫瘤抑制因子FBW7抗體包裝25g
干擾調(diào)節(jié)因子3(IRF3)elisa試劑盒英文名稱:IRF3 ELISA Kit粘附分子4抗體包裝5g
干擾γ誘導(dǎo)單核因子(MIγ)elisa試劑盒英文名稱:MIγ ELISA Kit鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體包裝10g
干擾γ(IFNγ)elisa試劑盒英文名稱:IFNγ ELISA Kit周期依賴性激5激活結(jié)合蛋白C53抗體包裝5g
干擾β(IFNβ)elisa試劑盒英文名稱:IFNβ ELISA Kit著絲粒蛋白H抗體包裝1g
中甸隔指孢Dactylella│zhongdianensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR載脂蛋白C3試劑盒乙酰蒲公英萜;Taraxeryl ac
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白C2試劑盒異古倫賓;IsocoluMbin
暫未定名Cystofilobasidium│infirmominiatum 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,Sigma C1768載脂蛋白C1試劑盒吲哚;6-Hydroxyindole
Calcein-AM/PI活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒乙二胺四乙鐵鈉鹽
其他 EDTA鐵鈉;EDTA一鈉鐵;乙二胺四乙一鈉鐵;(OC-6-21)-[[N,N’-1,2-乙二基雙[N-(羧基甲基)基乙根]](4-)N,N’,O,O’,O,N,O,N’]鐵(1-)鈉;鐵依地鈉;乙二胺四乙鈉鐵(Ⅲ)鹽
英文名稱: EDTA-FeNa
其他英文名稱: Ethylenediaminetetraacetic acid ferric sodium salt;EDTA ferric sodium salt;Edathamil;EDTA iron(III) sodium salt
產(chǎn)品規(guī)格: CP,98.0%
包裝:100克/500克
CAS號:15708-41-5
C10H12N2NaFeO8•3H2O=292.25
級別:CP
含量:≥98.0%
水溶解試驗(yàn):合格
氯化物:≤0.1%
性狀:黃色或黃褐色結(jié)晶粉末。無毒,加熱至240℃分解。溶于水和,微溶于乙
用途:生化研究。主要用作絡(luò)合劑;氧化劑;感光材料沖洗藥品及漂白劑;黑白膠片減薄劑。生化上用于消除由于痕量重金屬引起的催化反應(yīng)的抑制。植物細(xì)胞培養(yǎng)
保存:RT
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)