化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：質(zhì)粒pEGFP-N1 2μg
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013340
產(chǎn)品規(guī)格：2μg
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
AIF ELISA Kit 大鼠凋亡誘導(dǎo)因子Multi-class antibodies： 48T
TEM8 血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Bovine IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
ALP-B(Mouse Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit 小鼠骨特異性性磷B 96T
Phospho-NMDAR1(Ser896) 磷化谷受體1抗體 0.1ml
Beta-lactoglobulin β-乳球蛋白抗體 1ml
TEM8 血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
CK17(Human cytokeratin 17) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白17Multi-class antibodies： 48T
HCG Beta 人絨毛膜促性腺β亞基單抗Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mitochondrial Pyruvate dehydrogenase kinase 1 丙酮脫氫激1抗體 0.1ml
sPLA2(Human secreted phospholipase A2) ELISA Kit 人分泌型磷脂A2 96T
RANKL 骨保護(hù)蛋白配體抗體(破骨細(xì)胞分化因子) 0.1ml
CHD1 ATP依賴的解旋CHD1抗體 0.1ml
HCG Beta 人絨毛膜促性腺β亞基單抗Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit mouse IgG-Fc/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
GOLPH3 高爾基體外周膜蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh AMPK gamma 1 腺苷活化蛋白激γ1抗體 0.2ml
Integrin- Alpha V/CD49e /FITC 熒光標(biāo)記整合αV抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.1ml
Shiga-like toxin IIe variant subunit A/FITC 熒光標(biāo)記抗豬腫病大腸桿菌志賀樣Ⅱ型突變體(O139菌株)抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
質(zhì)粒pEGFP-N1 2μg人前列腺E受體2（EP2）elisa檢測(cè)試劑盒
人前列腺性磷（ACP3/PAP）elisa檢測(cè)試劑盒
人抑制性蛋白（IAP）elisa檢測(cè)試劑盒
人粒巨噬集落因子抗體（GM-CSF Ab）elisa檢測(cè)試劑盒
人內(nèi)皮脂肪（EL/LIPG）elisa檢測(cè)試劑盒
人抗原6復(fù)合物基因座A（Ly6a）elisa檢測(cè)試劑盒
人磷脂酰肌醇蛋白聚糖4（GPC4）elisa檢測(cè)試劑盒
人膜橋蛋白elisa檢測(cè)試劑盒
人平滑肌肌球蛋白（SMM）elisa檢測(cè)試劑盒
人纖維蛋白原相關(guān)蛋白1（FGL1）elisa檢測(cè)試劑盒
人卵清蛋白特異性IgG（OVA sIgG）elisa檢測(cè)試劑盒
人囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子（CFTR）elisa檢測(cè)試劑盒
人橋粒斑蛋白（DSP）elisa檢測(cè)試劑盒
人末端脫氧核糖核轉(zhuǎn)移（TDT）elisa檢測(cè)試劑盒
人基質(zhì)金屬蛋白原13 （Pro-MMP-13）elisa檢測(cè)試劑盒
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